凝胶的选择 按照层析物质分子量的巨细选择差异型号的凝胶，如除盐和除游离的荧光素，则可选用粗、中粒度的g25或g50，g250多用于疏散卵白质单体，g200多用于疏散卵白质凝胶聚合体......
一、凝胶的选择
按照层析物质分子量的巨细选择差异型号的凝胶，如除盐和除游离的荧光素，则可选用粗、中粒度的g25或g50，g250多用于疏散卵白质单体，g200多用于疏散卵白质凝胶聚合体等。
二、凝胶的预处理赏罚
称取适量的凝胶插手过量的缓冲液在冰箱（或室温）中充实膨胀，或在滚水中煮，膨胀时刻应按照差异型号的凝胶而定。
凝胶量与型号和层析柱巨细与规格及凝胶用量
层析柱规格 凝胶的规格和用量（g）
直径（cm） 高（cm） 容量（ml） g25 g50 g100 g200
0.9 15 9.5 2.5 1 0.6 0.3
0.9 30 19 5 2 1.2 0.6
0.9 60 38 10 4 2.5 1.2
1.6 20 40 10 4 2.5 1.2
1.6 40 80 20 8 5.0 2.4
1.6 70 140 35 14 9.0 4.4
1.6 100 200 50 20 12.5 6
2.6 40 210 50 20 12 7
2.6 70 370 90 35 20 12
2.6 100 530 130 50 30 17
2.6 60 1000 250 110 70 35
为使粒子匀称同等需举办浮选，即插手凝胶粒子后，轻轻搅拌，静置20min，倾去沉淀的粒子，云云重复数次即可。
三、装柱
层析柱的选择一样平常按照疏散样品的种类和样品的数目而定。纯化卵白质时，食品检测，柱床体积应为样品体积的25～100倍。去盐、游离荧光素约为样品体积的4～10 倍。柱太短，影响疏散结果。柱长一些，疏散结果好，但柱太长，则延迟疏散时刻，样品也稀释太过。层析柱的内径也要选择恰当。内径详尽，会产生“器壁效应”，即接近管壁的流速要大于中心的流速影响疏散结果。以是层析柱的内径和高度应有必然的比例。对付除盐来说应为1:5～1:25；对付纯化卵白质来说应为1:20～1:100。
四、加样与洗脱
样品体积不宜过多，最好为床体积的1％～5%，最多不要高出10%。样品浓度也不宜过大，浓渡过大粘度大，疏散结果差，一样平常不高出4%。
洗脱液应与膨胀同等，不然改换溶剂，凝胶体积会产生变革，影响疏散结果。洗脱液要有必然的离子强度和ph值。疏散血清卵白常用 0.02～0.1mol/l ph 6.9~8.0的pbs液（0.14mol/l nacl）和0.1mol/l ph8.0tris-hcl缓冲盐溶液（0.14mol/l nacl）。
五、洗脱液网络
操作自动分步网络器网络，并以20%磺基水杨酸测试，当卵白液下来时，开始分担网络，至无卵白液为止。
六、凝胶柱的一再行使与生涯
当样品的各组分所有洗脱下来之后，即可插手新的样品，继承行使。生涯要领有三种：
（1） 在液相中生涯最利便，即于凝胶悬液中插手防腐剂（如0.002%洗必泰）或高压灭菌后4℃生涯。此法至少可以生涯半年以上。
（2） 用完后，以水冲洗，然后用60%~70%酒精液冲洗，凝胶体积缩小，即在半紧缩状态下生涯。
（3） 恒久不消者，最好以干燥状态生涯，即水洗净后，用含乙醇的水洗，逐渐加大乙醇用量，最后用95%的乙醇洗，可所有去水，再用乙烯去除乙醇，生产技术，抽滤干，于 60℃~80℃干燥后生涯。加乙醇时，切忌一上来就用浓乙醇处理赏罚，以防结块。