elisa，酶联免疫法（enzyme-linked immunosorbent assay，elisa）是将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，利用抗原抗体的特异性反应，对样本中可溶性目的产物进行定量检测。
elisa 与常规免疫实验对比elisa样本制备简单；灵敏度高；特异性强；重复性好；操作简单；检测仪器易获得。
elisa（酶联免疫吸附）ihc（免疫组化）western bolt （蛋白质印迹法）
定性 定性 定性（一般不用）
多用于定量分析 半定量 定量
非定位 定位（优势） 半定位
灵敏度高 灵敏度中高 灵敏度高
血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液 组织、细胞切片 组织/细胞匀浆
分泌蛋白/细胞因子 胞内蛋白/膜蛋白 对指标定位没有要求
常见elisa种类
一、直接elisa
原理：将抗原与固相载体连接，洗涤除去未结合的抗原及杂质。加酶标抗体进行孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。ched i洗涤未结合的酶标抗体。此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。加底物反应。直接法主要用于测定抗原。
二、间接法elisa
原理：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入特异性一抗与固相抗原相结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，加酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，加底物显色。
三、双抗夹心法elisa
原理：双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子，但不适用于小分子抗原。将特异性抗体（捕获抗体）与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。加入待检样品，保温孵育。样品中的特异性抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。加酶标抗体（检测抗体）保温孵育。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。chedi洗涤未结合的酶标抗体。加底物反应。
双抗原夹心法测抗体的反应模式与测抗原相似，用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。
四、竞争法elisa
原理：竞争法elisa最为复杂，通常用于检测小分子如半抗原、激素、药物等。样品中待检游离抗原与固定于固相载体上的抗原一起竞争相同的有xianliang抗体，当样品中的游离抗原越多，就可结合越多的抗体，而固相抗原只能结合较少的抗体。反之亦然。经洗涤去除样品中的抗原与抗体的结合物，只留下固相抗原与抗体的结合物。显示经计算可得样品中抗原的含量。竞争法可根据实验设置直接法、间接法或夹心法形式。
不同 elisa 检测方法比较
方法应用范围优势缺点备注
双抗体夹心法 检测抗原常用的方法，用于检测大分子 灵敏度高、特异性强、抗原无需事先纯化 检测物需要拥有两个以上不同的抗原表位或多个相同的重复表位 不能用于小分子检测
直接法 检测抗体最常见的方法，对于病原体抗体检测和诊断 操作简便、无需二抗、避免交叉反应 实验中的一抗需要直接用酶标记，成本相对较高。 一抗特异性非常重要
间接法 同上 二抗可以加强信号 交叉反映几率高 抗原纯度重要
竞争法 适用于检测特异性抗体、抗原中有不易去除的干扰物 高效、快速 整体的敏感性和专一性较差 适用于小分子、半抗原检测，如cortisol等
elisa应用场景