愈伤组织的诱导hill(1967)最早报道从杂交茶香月季(hybridtearose)的茎上诱导了愈伤组织,该实验证明在培养基中添加2,4-d或添加naa和激动素kt均能很快诱导出愈伤组织。随后不同实验以不同品种为试验材料,从叶、叶柄、根、茎、原生质体、合子胚、花药、子房、花瓣、花萼、和花托成功地诱导了愈伤组织。
愈伤组织的成功诱导与品种的基因型有关?摇lloyd等(1988)曾研究roseprsica与xanthina,hybrida,clarissa,rcabrosa的愈伤发生能力,发现只有rosepersica与xanthina在ms基本培养基上,添加低浓度的bap和naa时,节间能产生愈伤,愈伤组织脆弱,呈淡黄绿色。kunitake等(1993)研究了roserugosathunb,rosemultiflora,roseallbacv,semiplenarosehybridacv,duplesroseharisonii,rosespinosissi的未成熟种子的愈伤发生能力,发现只有roserugosathurb能产生愈伤组织,品种rontl和soraya比品种baccara和mercedes更易产生愈伤(kintzios等,1999)。
外植体类型?摇aren等(1993)详细地调查了rosehybridacvmeirutral不同外植体的愈伤诱导率,发现不同外植体愈伤产生的能力不同,叶为90%,根为70%,节间为55%,花药为19%。
激素激素也是影响愈伤生成的重要因素,rout等(1991)以landora为材料,在添加ba和naa,2,4-d的ms的培养基上,外植体在接种的7~12d后,在近轴面的叶柄和中脉处产生愈伤,愈伤组织诱导频率高达92%。在接种后15~20d,外植体茎切端处产生愈伤,诱导率为76%。生长素种类和浓度对愈伤产生能力的影响同样很大。早期实验多采用naa结合bap或ba等,近年来多采用2,4—d,并证明2,4—d是诱导愈伤的必要因素(kintzios等,1999;rout等,1996;vandersalm等,1996;vises—suwan等,1997)。进一步研究发现2,4-d对愈伤的诱导效果依赖于月季的基因型,如2,4—d浓度从113umol/l增加到181umol/l降低了rosehybrida栽培种“care-freebeauty”的愈伤诱导频率,但该浓度则对另一个品种“grandgala”无影响。对于“redsunblaze”而言,当浓度从113umol/l增加到452umol/l,则表现出愈伤的诱导率提高了,随后当2,4—d再增加,则显著地降低愈伤的诱导频率。愈伤组织在诱导愈伤组织的培养基上能得到很好继代培养(subculture、li等,2002)。vandersalm等(1996)证明2,4—d对诱导rosepersica与xanthina和moneyway产生愈伤是非常必要的,进一步添加低浓度的ba有正效应,但如ba浓度过高,则产生抑制作用。与以上实验结果不同,kintzios等(1999)则发现2,4—d对愈伤诱导有负影响作用,可能因为采用的外植体是成熟的叶片。
合子胚的发育时期对愈伤的形成能力也有影响?摇如处于心形胚的合子胚,其愈伤诱导率只有2%,子叶胚时的合子胚愈伤诱导率达到85%。