阴沟肠杆菌探针法荧光定量pcr试剂盒操作步骤：
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×pcr buffer 5μl
dntp mixl 4μl
引物1(10pm) 2μl
引物2(10pm) 2μl
taq酶(2u/μl) 1μl
dna模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddh2o至 50 μl
视pcr仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置pcr仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,pcr产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.pcr的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μllufang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。