在荧光显微镜的基本原理是用荧光剂的帮助细胞成分的高度特异性的可视化。 这可以是一个荧光蛋白-例如绿色荧光蛋白 -遗传连锁到感兴趣的蛋白质。 如果克隆是不可能的 - 例如组织学样品中的 - 它是需要使用其他技术,如免疫荧光染色来可视化目的蛋白质。 用于此目的的抗体的利用,这是直接或间接地连接到不同的荧光染料和结合到适当的目标结构。 另外,用荧光染料荧光显微镜的帮助下,不仅限于蛋白,但它也使染色核酸,聚糖和其它结构的机会。 像钙离子甚至非生物物质可以被检测出来。 本文介绍了常用的荧光剂。
免疫荧光在荧光显微镜有两种方式来可视化你感兴趣的蛋白质。无论是与固有荧光信号的帮助 - 通过克隆,因此荧光蛋白基因链接到目标蛋白的手段。或借助荧光标记的特异性结合到感兴趣的蛋白质的抗体。对一些生物学问题是比较有用,甚至必要执行后者。在组织学样品的情况下,例如,它是不可能使用荧光蛋白,因为在一般的样品由不持有任何荧光蛋白质的生物来源。此外,如果一个正常运作的抗体可用,免疫荧光比荧光蛋白技术快很多,是你有兴趣和转染的dna基因克隆到足够的细胞。荧光蛋白的另一缺点在于它们的存在的蛋白质本身的性质。有了它,他们有一个细胞,其可导致功能障碍或误解关于感兴趣的附着蛋白中的特定蛋白质性特征。然而,应当考虑到使用荧光蛋白通常是选择的方法来观看活细胞。
免疫是利用抗体与其抗原的非常特异性结合亲和力的。这可以有两种不同的外观。的方法是使用一种荧光标记的抗体被结合到感兴趣的蛋白质。这就是所谓的直接免疫荧光 。
在大多数情况下,有使用了两种形式的抗体。个结合靶蛋白和未荧光标记的自身(第1抗体)。但是这是结合1 次抗体的第二个(2 次抗体)特异性携带荧光染料。这种方法被称为间接免疫荧光和具有几个优点。一方面有一个放大效应,因为多于一个的2 次抗体结合一种1 次抗体。另一方面,没有必要所有的时间来标记各抗体对你喜爱的蛋白与荧光染料,但可以利用商业荧光标记的第二抗体。 对于免疫荧光广泛使用的荧光染料是fitc,tritc或几个的alexa fluor®它们在下面提及的染料。
fitc和tritc异硫氰酸荧光素(fitc)是有机荧光染料这仍然是在免疫荧光和流式细胞仪使用。它在五百十七分之四百九十五处具有一个激发/发射峰并可以耦合到不同的抗体与它的反应性异硫氰酸酯基,其结合至氨基,巯基,咪唑基,酪氨酰或羰基上的蛋白的帮助。其基本形式- 荧光素 -具有332克/摩尔的摩尔质量和通常用作荧光示踪剂fitc(389克/摩尔)为其用于荧光显微镜的染料中的一种,并作为进一步的原点。荧光染料一样的alexafluor®488。其荧光活性是由于其大的共轭芳族电子系统,它是由光在蓝色光谱激发。
    图1:果蝇胚胎发育,绿色:fitc,红色:tritc                        
很多时候同日而语用fitc使用的染料是其发音相似的伙伴tritc(tetramethylrhodamine-5-(and 6)-isothiocyanate)。在对比fitc,tritc不是荧光素,但罗丹明家族的衍生物。罗丹明也有大量的共轭芳族电子系统,是什么导致了他们的荧光行为。相反,fitc,tritc(479克/摩尔)是兴奋与550纳米的大绿色光谱的光。 其大发射躺在在573纳米。 键合到蛋白质(例如抗体)也基于反应性异硫氰酸酯基团。
即使fitc和tritc仍然在使用,他们推荐的艺术显微镜的状态,而弱荧光染料和不。他们的利润是根据自己的经济代价。
青色素cy2,cy3,cy5和cy7:这个相对较小的荧光染料的收藏是从花青这也是因为他们的名字由来的。所有的人都可以通过它们的反应性基团被连接到核酸或蛋白质。对于蛋白质性标记马来酰亚胺基团的使用,例如。 有趣的是 - 关于荧光 - cy5的是它的电子周边敏感。这可以用于酶测定。附着蛋白引线构象变化,以在荧光发射的正或负改变。此外cy3和cy5可用于fret实验。花青染料是比较老的荧光染料和为具有改进的亮度,耐光性,量子产率等其他荧光染料的基础
alexa fluor®染料alexa fluor®染料是其中使用非常经常在荧光显微镜负电荷和亲水性荧光染料的一个大的基团。他们的称谓可以追溯到它的发明者理查德·保罗·格兰谁命名他的儿子亚历克斯毕浩然后的染料。这个标签是分子探针(的子公司的商标寿命技术)。此外,各激光激发波长是在其标签提及。例如非常广泛使用的alexa fluor®488具有493纳米,它允许励磁用标准488 nm激光激发大值。alexa fluor®488具有519纳米的大发射。有了这个特性,alexa fluor®488具有非常相似的特性fitc。虽然的alexa fluor®488是荧光素衍生物,而相比之下,fitc它具有更好的稳定性,亮度和较低的ph敏感性。所有的alexa fluor®染料的荧光素一样,香豆素,花青或罗丹明不同的基本荧光物质(如的alexa fluor®546 ,alexa fluor®633)磺化形式。它们的摩尔质量范围从410至1400克/摩尔。
    图2:转基因小鼠胚胎,体节interlimb,一个e10.5转基因小鼠胚胎的五体节interlimb:epaxialmyf5绿色荧光蛋白; 免疫染色gfp -alexa 488;用结蛋白-cy3的染色胚胎肌纤维,细胞核揭示用hoechst尺寸从上到下:3.5毫米(a)中,800微米(b)中。 的aurélie乔里,cellules souches等发展署,法国巴斯德研究所,法国巴黎和igbmc,igbmc成像中心                        
图3:小鼠成纤维细胞,绿色:f-肌动蛋白,fitc,红色:微管蛋白,cy5的,蓝色:细胞核,dapi。 冈特博士吉斯,马克斯·普朗克医学研究所,德国海德堡                        
dna染色在荧光显微镜不仅蛋白质结构的利益,而且核酸。有时,有必要通过检测其细胞核以限定细胞的确切位置或数量。其中见的dna污斑是dapi(4',6-二脒基-2-苯基),其结合到在dna双螺旋的丰富的区域。如果连接到dna相比,其未绑定状态dapi荧光强度增加。它通过uv -light与358纳米的大激发。发射谱很广,在461 nm的峰值。弱荧光也可以为rna结合检测。在这种情况下,发射转移到500纳米。有趣的是,dapi能够渗透完整质膜。因此,它可以在固定的,以及在活细胞中使用。
第二个广泛使用的dna染色方法是赫斯特染料,它初是由化工公司赫斯特公司生产的家人。赫斯特33258,赫斯特33342和赫斯特34580是双- benzimides与嵌入倾向at丰富的地区,于是后者不经常使用。以dapi类似它们是由紫外线 -light并在其移动到510-540纳米未绑定状态455nm的大发射激发。hoechst的污渍也细胞渗透性,因此可以在固定和活细胞一起使用。以dapi的差别就是其较低的毒性。
一种膜防渗dna染色是化化。它,它通常被用于在细胞培养物中活的和死的细胞之间进行区分,因为它`吨输入完整的细胞。propidium-也是嵌入剂,但与不同的碱基未结合偏好。在核酸结合状态,它的大激发是在538纳米。发射是在617纳米。未结合的化-化物激发和发射大值偏移到较低的波长和强度较低。它也可以结合的rna,而不改变它的荧光特性。 区分的rna的dna,有必要使用适当的核酸酶。
其能够使没有先前操纵dna和rna之间的差的染料是吖啶橙。它激发/发射大对是在dna结合的版本,502纳米/ 525纳米和转向460纳米/ 650纳米的rna束缚态。 此外,它能够进入酸性隔室象溶酶体。 有阳离子染料被质子化。 在这种酸性环境吖啶橙是由光的蓝色光谱激发,而发射是橙色区域的。 因为细胞凋亡有很多吞没酸性隔室的这使它成为各种细胞的经常使用的标记物。
小室和细胞器特定的染料    图4:pukinje细胞,小鼠小脑皮质的三重标记矢状窦旁一节。 红色:抗钙结合蛋白d28k / cy3的绿色:抗gfap / cy5的,蓝:赫斯特33258                        
图5:牛肺的内皮细胞。 红色:线粒体标记mitotracker®红cmxros,绿色:dapi标记细胞核:标有绿色荧光bodipy®fl phallacidin,蓝f-肌动蛋白。 这张照片是用3d盲解增强                        
在荧光显微镜它常常是合理的染色细胞区室像溶酶体或内体和细胞器像线粒体。为此,有这将在本节提到可用特定的染料的调色板。
一种公知的方法来观察线粒体是mitotracker®的利用率。这是一个细胞渗透性染料与轻度硫醇反应性氯基部分。它,它可以共价通过用半*残基的游离巯基反应结合基质蛋白。mitotracker®存在于不同的颜色和修改(第表1)和是分子探针的商标。在对比像若丹明123或tetramethylrosamine,mitotracker常规线粒体特定污渍®与固定剂的膜电位的破坏后,不洗出。
根据线粒体的污渍也有染料标记的酸性区室像被称为lysotracker溶酶体。这些是连接到荧光团膜可渗透弱碱。可能的是这些基地都因为质子化的酸性车厢的亲和力。lysotrackers,可以在不同的颜色(第表1)。
一个可比车厢溶酶体是像酿酒酵母真菌液泡。这种膜封闭的空间是一种酸性性质也。形象化它在荧光显微镜的一种方法是使用基于苯乙烯基染料像调频4-64®或fm 5-95®的。
当涉及到蛋白质分泌实验内质网(er)是一种特殊的兴趣。一个经典的染料染色这个车厢是dioc6(3)。它有急诊室的偏好,但仍然结合到其他膜像线粒体。专门染色质的另一种方法是使用er-跟踪器一样er-跟踪绿色和红色。这两者都是链接到*基bodipy染料-一个sulfonylurease -结合到atp敏感性钾通道的*驻留在er膜bodipy(硼二吡咯亚甲基)描述了一组相对不敏感的ph值的染料其中几乎都是不溶于水的。这并不能让他们对蛋白标记,但脂质和膜标签的一个很好的工具。
相邻的隔间内质网-高尔基仪器 -可以用荧光神经酰胺类似物像nbd c6神经酰胺和bodipy fl c5神经酰胺标记。神经酰胺是它们在高尔基体高度富集鞘脂类。
随着进一步的基于脂质染料的帮助下,可以进行染色样脂质筏特殊的膜的区域。 这些富含*的域可以通过使用nbd-6*或nbp-12*除其他(可视化阿凡提极性脂质 )。
除了使用特殊的非蛋白荧光染料标记的细胞区室,也可以染色的与蛋白质的帮助下与在小区的不同位置偏好感兴趣的区域。 这些蛋白质可以链接到一个荧光染料,并在荧光显微镜观察。 对于这种方法的一个例子是小麦胚芽凝集素(wga)的特异性结合唾液酸和存在于质膜n-乙酰用法。 wga耦合至荧光染料。 与它质膜可以观察到。
离子成像在神经元的研究中,基因的活性或细胞运动的情况下 - 例如 - 它是感兴趣了解的细胞的离子浓度。 钠,钙,氯离子或镁离子具有在许多不同的细胞事件的深刻影响。 通常,离子可被捕获与荧光标记的螯合剂,当结合到合适的离子改变它们的光谱特性的帮助。 这一原则在钙指标fura-2,印度1,荧光- 3荧光- 4 和钙绿 ,例如实现。
用于检测钠,sbfi(sodium-binding benzofuran isophthalate)或绿色钠常用。pbfi(potassium-binding benzofurzanisophthalate)检测钾离子。
有趣的是也有基于蛋白质的钙指标。 其中之一是基于所述水母化学发光蛋白水母发光蛋白。水母发光蛋白的发光团腔肠素,分子氧和钙离子的相互作用导致蓝色光的释放-在一个非常突出的机构的荧光蛋白质的发现。
荧光染料和它们的激发和发射波长峰上面提到的所有染料都列出在下表中。 另外附加的荧光染料与它们激发和发射波长峰一起提及。
表 1                        荧光染料             激发             发射         
                            indo-1, ca saturated             331 nm             404 nm         
                    indo-1 ca2+             346 nm             404 nm         
                    cascade blue bsa ph 7.0             401 nm             419 nm         
                    cascade blue             398 nm             420 nm         
                    lysotracker blue             373 nm             421 nm         
                    alexa 405             401 nm             421 nm         
                    lysosensor blue ph 5.0             374 nm             424 nm         
                    lysosensor blue             374 nm             424 nm         
                    dylight 405             399 nm             434 nm         
                    dylight 350             332 nm             435 nm         
                    bfp (blue fluorescent protein)             380 nm             439 nm         
                    alexa 350             343 nm             441 nm         
                    7-amino-4-methylcoumarin ph 7.0             346 nm             442 nm         
                    amino coumarin             345 nm             442 nm         
                    amca conjugate             347 nm             444 nm         
                    coumarin             360 nm             447 nm         
                    7-hydroxy-4-methylcoumarin             360 nm             447 nm         
                    7-hydroxy-4-methylcoumarin ph 9.0             361 nm             448 nm         
                    6,8-difluoro-7-hydroxy-4-methylcoumarin ph 9.0             358 nm             450 nm         
                    hoechst 33342             352 nm             455 nm         
                    pacific blue             404 nm             455 nm         
                    hoechst 33258             352 nm             455 nm         
                    hoechst 33258-dna             352 nm             455 nm         
                    pacific blue antibody conjugate ph 8.0             404 nm             455 nm         
                    po-pro-1             434 nm             457 nm         
                    po-pro-1-dna             435 nm             457 nm         
                    popo-1             433 nm             457 nm         
                    popo-1-dna             433 nm             458 nm         
                    dapi-dna             359 nm             461 nm         
                    dapi             358 nm             463 nm         
                    marina blue             362 nm             464 nm         
                    sytox blue-dna             445 nm             470 nm         
                    cfp (cyan fluorescent protein)             434 nm             474 nm         
                    ecfp (enhanced cyan fluorescent protein)             437 nm             476 nm         
                    1-anilinonaphthalene-8-sulfonic acid (1,8-ans)             375 nm             479 nm         
                    indo-1, ca free             346 nm             479 nm         
                    1,8-ans (1-anilinonaphthalene-8-sulfonic acid)             375 nm             480 nm         
                    bo-pro-1-dna             462 nm             482 nm         
                    bopro-1             462 nm             482 nm         
                    bobo-1-dna             461 nm             484 nm         
                    syto 45-dna             451 nm             486 nm         
                    evoglow-pp1             448 nm             495 nm         
                    evoglow-bs1             448 nm             496 nm         
                    evoglow-bs2             448 nm             496 nm         
                    auramine o             431 nm             501 nm         
                    dio             487 nm             501 nm         
                    lysosensor green ph 5.0             447 nm             502 nm         
                    cy 2             489 nm             503 nm         
                    lysosensor green             447 nm             504 nm         
                    fura-2, high ca             336 nm             504 nm         
                    fura-2 ca2+sup>             336 nm             505 nm         
                    syto 13-dna             488 nm             506 nm         
                    yo-pro-1-dna             491 nm             507 nm         
                    yoyo-1-dna             491 nm             509 nm         
                    egfp (enhanced green fluorescent protein)             488 nm             509 nm         
                    lysotracker green             503 nm             509 nm         
                    gfp (s65t)             489 nm             509 nm         
                    bodipy fl, meoh             502 nm             511 nm         
                    sapphire             396 nm             511 nm         
                    bodipy fl conjugate             503 nm             512 nm         
                    mitotracker green             490 nm             512 nm         
                    mitotracker green fm, meoh             490 nm             512 nm         
                    fluorescein 0.1 m naoh             493 nm             513 nm         
                    calcein ph 9.0             494 nm             514 nm         
                    fluorescein ph 9.0             490 nm             514 nm         
                    calcein             493 nm             514 nm         
                    fura-2, no ca             367 nm             515 nm         
                    fluo-4             494 nm             516 nm         
                    fda             495 nm             517 nm         
                    dtaf             495 nm             517 nm         
                    fluorescein             495 nm             517 nm         
                    fluorescein antibody conjugate ph 8.0             493 nm             517 nm         
                    cfda             495 nm             517 nm         
                    fitc             495 nm             517 nm         
                    alexa fluor 488 hydrazide-water             493 nm             518 nm         
                    dylight 488             493 nm             518 nm         
                    5-fam ph 9.0             492 nm             518 nm         
                    fitc antibody conjugate ph 8.0             495 nm             519 nm         
                    alexa 488             493 nm             520 nm         
                    rhodamine 110             497 nm             520 nm         
                    rhodamine 110 ph 7.0             497 nm             520 nm         
                    acridine orange             431 nm             520 nm         
                    alexa fluor 488 antibody conjugate ph 8.0             499 nm             520 nm         
                    bcecf ph 5.5             485 nm             521 nm         
                    picogreendsdna quantitation reagent             502 nm             522 nm         
                    sybr green i             498 nm             522 nm         
                    rhodaminen green ph 7.0             497 nm             523 nm         
                    cyquant gr-dna             502 nm             523 nm         
                    neurotrace 500/525, green fluorescent nissl stain-rna             497 nm             524 nm         
                    dansylcadaverine             335 nm             524 nm         
                    rhodol green antibody conjugate ph 8.0             499 nm             524 nm         
                    fluoro-emerald             495 nm             524 nm         
                    nissl             497 nm             524 nm         
                    fluorescein dextran ph 8.0             501 nm             524 nm         
                    rhodamine green             497 nm             524 nm         
                    5-(and-6)-carboxy-2', 7'-dichlorofluorescein ph 9.0             504 nm             525 nm         
                    dansylcadaverine, meoh             335 nm             526 nm         
                    eyfp (enhanced yellow fluorescent protein)             514 nm             526 nm         
                    oregon green 488             498 nm             526 nm         
                    oregon green 488 antibody conjugate ph 8.0             498 nm             526 nm         
                    fluo-3             506 nm             527 nm         
                    bcecf ph 9.0             501 nm             527 nm         
                    sbfi-na+             336 nm             527 nm         
                    fluo-3 ca2+             506 nm             527 nm         
                    rhodamine 123, meoh             507 nm             529 nm         
                    flash             509 nm             529 nm         
                    calcium green-1 ca2+             506 nm             529 nm         
                    magnesium green             507 nm             530 nm         
                    dm-nerf ph 4.0             493 nm             530 nm         
                    calcium green             506 nm             530 nm         
                    citrine             515 nm             530 nm         
                    lysosensor yellow ph 9.0             335 nm             530 nm         
                    to-pro-1-dna             515 nm             531 nm         
                    magnesium green mg2+             507 nm             531 nm         
                    sodium green na+             507 nm             531 nm         
                    toto-1-dna             514 nm             531 nm         
                    oregon green 514             512 nm             532 nm         
                    oregon green 514 antibody conjugate ph 8.0             513 nm             533 nm         
                    nbd-x             466 nm             534 nm         
                    dm-nerf ph 7.0             509 nm             537 nm         
                    nbd-x, meoh             467 nm             538 nm         
                    ci-nerf ph 6.0             513 nm             538 nm         
                    alexa 430             431 nm             540 nm         
                    alexa fluor 430 antibody conjugate ph 7.2             431 nm             540 nm         
                    ci-nerf ph 2.5             504 nm             541 nm         
                    lucifer yellow, ch             428 nm             542 nm         
                    lysosensor yellow ph 3.0             389 nm             542 nm         
                    6-tet, se ph 9.0             521 nm             542 nm         
                    eosin antibody conjugate ph 8.0             525 nm             546 nm         
                    eosin             524 nm             546 nm         
                    6-carboxyrhodamine 6g ph 7.0             526 nm             547 nm         
                    6-carboxyrhodamine 6g, hydrochloride             525 nm             547 nm         
                    bodipy r6g se             528 nm             547 nm         
                    bodipy r6g, meoh             528 nm             547 nm         
                    6 joe             520 nm             548 nm         
                    cascade yellow antibody conjugate ph 8.0             399 nm             549 nm         
                    cascade yellow             399 nm             549 nm         
                    mbanana             540 nm             553 nm         
                    alexa fluor 532 antibody conjugate ph 7.2             528 nm             553 nm         
                    alexa 532             528 nm             553 nm         
                    erythrosin-5-isothiocyanate ph 9.0             533 nm             554 nm         
                    6-hex, se ph 9.0             534 nm             559 nm         
                    morange             548 nm             562 nm         
                    mhoneydew             478 nm             562 nm         
                    cy 3             549 nm             562 nm         
                    rhodamine b             543 nm             565 nm         
                    dii             551 nm             565 nm         
                    5-tamra-meoh             543 nm             567 nm         
                    alexa 555             553 nm             568 nm         
                    alexa fluor 555 antibody conjugate ph 7.2             553 nm             568 nm         
                    dylight 549             555 nm             569 nm         
                    bodipy tmr-x, se             544 nm             570 nm         
                    bodipy tmr-x, meoh             544 nm             570 nm         
                    po-pro-3-dna             539 nm             571 nm         
                    po-pro-3             539 nm             571 nm         
                    rhodamine             551 nm             573 nm         
                    bodipy tmr-x conjugate             544 nm             573 nm         
                    popo-3             533 nm             573 nm         
                    alexa 546             562 nm             573 nm         
                    bodipy tmr-x antibody conjugate ph 7.2             544 nm             573 nm         
                    calcium orange ca2+             549 nm             573 nm         
                    tritc             550 nm             573 nm         
                    calcium orange             549 nm             574 nm         
                    rhodaminephalloidin ph 7.0             558 nm             575 nm         
                    mitotracker orange             551 nm             575 nm         
                    mitotracker orange, meoh             551 nm             575 nm         
                    phycoerythrin             565 nm             575 nm         
                    magnesium orange             550 nm             575 nm         
                    r-phycoerythrin ph 7.5             565 nm             576 nm         
                    5-tamra ph 7.0             553 nm             576 nm         
                    5-tamra             549 nm             577 nm         
                    rhod-2             552 nm             577 nm         
                    fm 1-43             472 nm             578 nm         
                    rhod-2 ca2+             553 nm             578 nm         
                    tetramethylrhodamine antibody conjugate ph 8.0             552 nm             578 nm         
                    fm 1-43 lipid             473 nm             579 nm         
                    lolo-1-dna             568 nm             580 nm         
                    dtomato             554 nm             581 nm         
                    dsred             563 nm             581 nm         
                    dapoxyl (2-aminoethyl) sulfonamide             372 nm             582 nm         
                    tetramethylrhodamine dextran ph 7.0             555 nm             582 nm         
                    fluor-ruby             554 nm             582 nm         
                    resorufin             571 nm             584 nm         
                    resorufin ph 9.0             571 nm             584 nm         
                    mtangerine             568 nm             585 nm         
                    lysotracker red             578 nm             589 nm         
                    lissaminerhodamine             572 nm             590 nm         
                    cy 3.5             578 nm             591 nm         
                    rhodamine red-x antibody conjugate ph 8.0             573 nm             591 nm         
                    sulforhodamine 101, etoh             578 nm             593 nm         
                    jc-1 ph 8.2             593 nm             595 nm         
                    jc-1             592 nm             595 nm         
                    mstrawberry             575 nm             596 nm         
                    mitotracker red             578 nm             599 nm         
                    mitotracker red, meoh             578 nm             599 nm         
                    x-rhod-1 ca2+             580 nm             602 nm         
                    alexa fluor 568 antibody conjugate ph 7.2             579 nm             603 nm         
                    alexa 568             576 nm             603 nm         
                    5-rox ph 7.0             578 nm             604 nm         
                    5-rox (5-carboxy-x-rhodamine, triethylammonium salt)             578 nm             604 nm         
                    bo-pro-3-dna             574 nm             604 nm         
                    bopro-3             574 nm             604 nm         
                    bobo-3-dna             570 nm             605 nm         
                    ethidium bromide             524 nm             605 nm         
                    reash             597 nm             608 nm         
                    calcium crimson             589 nm             608 nm         
                    calcium crimson ca2+             590 nm             608 nm         
                    mrfp             585 nm             608 nm         
                    mcherry             587 nm             610 nm         
                    texas red-x antibody conjugate ph 7.2             596 nm             613 nm         
                    hcred             590 nm             614 nm         
                    dylight 594             592 nm             616 nm         
                    ethidium homodimer-1-dna             528 nm             617 nm         
                    ethidiumhomodimer             528 nm             617 nm         
                    propidium iodide             538 nm             617 nm         
                    sypro ruby             467 nm             618 nm         
                    propidium iodide-dna             538 nm             619 nm         
                    alexa 594             590 nm             619 nm         
                    bodipy tr-x, se             588 nm             621 nm         
                    bodipy tr-x, meoh             588 nm             621 nm         
                    bodipy tr-x phallacidin ph 7.0             590 nm             621 nm         
                    alexa fluor 610 r-phycoerythrin streptavidin ph 7.2             567 nm             627 nm         
                    yo-pro-3-dna             613 nm             629 nm         
                    di-8 anepps             469 nm             630 nm         
                    di-8-anepps-lipid             469 nm             631 nm         
                    yoyo-3-dna             612 nm             631 nm         
                    nile red-lipid             553 nm             636 nm         
                    nile red             559 nm             637 nm         
                    dylight 633             624 nm             646 nm         
                    mplum             587 nm             649 nm         
                    to-pro-3-dna             642 nm             657 nm         
                    ddao ph 9.0             648 nm             657 nm         
                    fura red, high ca             434 nm             659 nm         
                    allophycocyanin ph 7.5             651 nm             660 nm         
                    apc (allophycocyanin)             650 nm             660 nm         
                    nile blue, etoh             631 nm             660 nm         
                    toto-3-dna             642 nm             661 nm         
                    cy 5             646 nm             664 nm         
                    bodipy 650/665-x, meoh             646 nm             664 nm         
                    alexa fluor 647 r-phycoerythrin streptavidin ph 7.2             569 nm             666 nm         
                    dylight 649             652 nm             668 nm         
                    alexa fluor 647 antibody conjugate ph 7.2             653 nm             668 nm         
                    alexa 647             653 nm             669 nm         
                    fura red ca2+             435 nm             670 nm         
                    atto 647             644 nm             670 nm         
                    fura red, low ca             472 nm             673 nm         
                    carboxynaphthofluorescein ph 10.0             600 nm             674 nm         
                    alexa 660             664 nm             691 nm         
                    alexa fluor 660 antibody conjugate ph 7.2             663 nm             691 nm         
                    cy 5.5             673 nm             692 nm         
                    alexa fluor 680 antibody conjugate ph 7.2             679 nm             702 nm         
                    alexa 680             679 nm             703 nm         
                    dylight 680             678 nm             706 nm         
                    alexa fluor 700 antibody conjugate ph 7.2             696 nm             719 nm         
                    alexa 700             696 nm             720 nm         
                    fm 4-64, 2% chaps             506 nm             751 nm         
                    fm 4-64             508 nm             751 nm
   
 
   