nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）活性检测试剂盒商品货号：ms1002
英文名称：micro nad-malate dehydrogenase（nad-mdh）assay kit
别名：nad-苹果酸脱氢酶试剂盒 nad-mdh kit nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）试剂盒 nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）测试盒
检测方法：微量法
商品货号：商品品牌：规格基本售价选择规格
ms1002-100管/96样 索桥生物 100管/96样 ￥550.00元
测定意义：
mdh （ec 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中mdh是tca循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中mdh催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，mdh在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，mdh分为nad-依赖的mdh和nadp-依赖的mdh，细菌中通常只含有nad-mdh，在真核细胞中，nad-mdh分布于细胞质和线粒体中。
测定原理：
nad-mdh催化nadh还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。
货号：ms1002 规格：100管/96样
nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
mdh （ec 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中mdh是tca循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中mdh催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，mdh在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，mdh分为nad-依赖的mdh和nadp-依赖的mdh，细菌中通常只含有nad-mdh，在真核细胞中，nad-mdh分布于细胞质和线粒体中。
测定原理：
nad-mdh催化nadh还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一、提取液100 ml×1瓶，在4℃保存；
试剂二、液体20 ml×1瓶，在4℃保存；
试剂三、粉剂×1瓶，-20℃保存；
样本测定的准备：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为1000~2000：1的比例（建议2000万细菌或细胞加入1ml试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200w，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。2、检测工作液的配制：用时在试剂三中加入19ml试剂二和0.5ml蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、测定前将检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。
4、在微量石英比色皿或96孔板中加入5μl样本和195μl工作液，混匀后立即记录340nm处20s时的吸光值a1和 1min20s后的吸光值a2，计算δa=a1-a2。
注意：若a1-a2大于0.5，需将样本用提取液稀释，使a1-a2小于0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
nad-mdh活力单位的计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）nad-mdh活力的计算
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol的nadh定义为一个酶活力单位。
nad-mdh（nmol/min/ml）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷v样÷t=6430×δa
2、组织、细菌或细胞中nad-mdh活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的nadh定义为一个酶活力单位。
nad-mdh（nmol/min/mg prot）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷(v样×cpr) ÷t=6430×δa÷cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的nadh定义为一个酶活力单位。
nad-mdh（nmol/min/g 鲜重）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷（w× v样÷v样总）÷t =6430×δa÷w
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的nadh定义为一个酶活力单位。
nad-mdh（nmol/min/104 cell）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷（2000×v样÷v样总）÷t=3.215×δa
v反总：反应体系总体积，2×10-4 l；ε：nadh摩尔消光系数，6.22×103 l / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；v样：加入样本体积，0.005 ml；v样总：加入提取液体积，1 ml；t：反应时间，1 min；w：样本质量，g；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；2000：细胞或细菌总数，2000万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）nad-mdh活力的计算
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol的nadh定义为一个酶活力单位。
nad-mdh（nmol/min/ml）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷v样÷t=12860×δa
2、组织、细菌或细胞中nad-mdh活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的nadh定义为一个酶活力单位。
nad-mdh（nmol/min/mg prot）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷(v样×cpr) ÷t=12860×δa÷cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织中每分钟消耗1 nmol的nadh定义为一个酶活力单位。
nad-mdh（nmol/min/g 鲜重）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷（w× v样÷v样总）÷t =12860×δa÷w
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的nadh定义为一个酶活力单位。
nad-mdh（nmol/min/104 cell）=[δa×v反总÷（ε×d）×109]÷（2000×v样÷v样总）÷t=6.43×δa
v反总：反应体系总体积，2×10-4 l；ε：nadh摩尔消光系数，6.22×103 l / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；v样：加入样本体积，0.005 ml；v样总：加入提取液体积，1 ml；t：反应时间，1 min；w：样本质量，g；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；2000：细胞或细菌总数，2000万。
辅酶ⅰ系列 　 　 　 　
qs1000 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒 可见分光光度法 50管/24样 500
ms1000 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒 微量法 100管/48样 920
qs1001 乳酸脱氢酶（ldh）测试盒 可见分光光度法 50管/24样 170
ms1001 乳酸脱氢酶（ldh）测试盒 微量法 100管/48样 330
qs1002 nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 280
ms1002 nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）测试盒 微量法 100管/96样 550
qs1003 nadp-苹果酸脱氢酶（nadp-mdh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 320
ms1003 nadp-苹果酸脱氢酶（nadp-mdh）测试盒 微量法 100管/96样 600
qs1004 nadh氧化酶（nox）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 450
ms1004 nadh氧化酶（nox）测试盒 微量法 100管/96样 850
qs1005-50 柠檬酸合酶(cs）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 3200
qs1005-25 柠檬酸合酶(cs）测试盒 可见分光光度法 25管/24样 2000
ms1005 柠檬酸合酶(cs）测试盒 微量法 100管/48样 3500
qs1006 丙酮酸脱羧酶（pdc）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 720
ms1006 丙酮酸脱羧酶（pdc）测试盒 微量法 100管/96样 1400
qs1007 醇脱氢酶（adh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 280
ms1007 醇脱氢酶（adh）测试盒 微量法 100管/96样 550
qs1008 单脱氢抗坏血酸还原酶（mdhar）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 800
ms1008 单脱氢抗坏血酸还原酶（mdhar）测试盒 微量法 100管/96样 1550
qs1009 乙醛脱氢酶（aldh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 420
ms1009 乙醛脱氢酶（aldh）测试盒 微量法 100管/96样 800
qs1010 nad激酶（nadk）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 600
ms1010 nad激酶（nadk）测试盒 微量法 100管/48样 1100
qs1011 线粒体呼吸链复合体ⅰ/nadh-辅酶q还原酶测试盒 紫外分光光度法 25管/24样 1280
ms1011 线粒体呼吸链复合体ⅰ/nadh-辅酶q还原酶测试盒 微量法 100管/96样 2500