t5 exonuclease是一种沿5'→3'方向降解dna的核酸外切酶。它既能从dna 5'末端起始消化，也可以从线性或环状双链dna的缺口(gap)或缺刻(nick)处起始消化，但不会降解超螺旋双链dna。可应用于无缝克隆（同源重组克隆）、降解碱裂解提取质粒中的变性dna等。
图1. t5 exonuclease原理图
无缝克隆无缝克隆是目前常用于生物学研究的分子克隆技术，它基于dna同源序列的互补配对，通过酶类的介入，将这些互补配对的dna片段连接起来，从而形成完整的双链dna。其组装主要利用了t5 exonuclease、phusion高保真dna聚合酶与taq dna连接酶之间的协同作用。这三个酶作用过程大致如下：
切割：t5 exonuclease从dna片段的5'端切割一条链，产生dna 3'突出末端。之后互补的dna片段同源末端进行退火配对结合，形成一个有间隙的环状dna；
填补：phusion dna高保真dna聚合酶通过dna合成填补间隙，产生一个只有缺刻的环状dna；
连接：taq dna连接酶通过形成磷酸二酯键修复缺刻，得到一个完整的双链dna，也就是完整的环状质粒。
图2. 无缝克隆原理图[1]
翌圣t5 exonuclease翌圣t5 exonuclease(cat#14538es)由翌圣镁孚泰生物zymeeditor酶进化平台经过重组表达获得，无切口酶残留，应用于无缝克隆，阳性克隆率可达100%！
部分数据展示01应用到无缝克隆，阳性克隆100%
使用t5 exonuclease进行无缝克隆，分别连接2、3、4个片段，实验结果表明，翌圣t5 exonuclease运用到无缝克隆中，阳性克隆率可达100%（12/12）。
图3. 无缝克隆效果图
02无切口酶残留
将30 u不同批次的t5 exonuclease分别与相应的底物dna在37℃孵育4 h，琼脂糖凝胶电泳检测结果表明，翌圣t5 exonuclease无切口酶残留。
图4. 切口酶检测
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应用场景
产品名称
产品货号
gibson组装
t5 exonuclease
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