想快速区分不同胰蛋白酶？这三点是关键！
胰蛋白酶大致可以分为两种，一种是传统使用的动物源性的胰蛋白酶，普遍发现于脊椎动物消化系统，直接提取自牛或猪的胰腺组织；另一种则是非动物源性胰蛋白酶，即利用基因重组技术生产的重组胰蛋白酶。01应用区别
胰蛋白酶
理化性质
胰蛋白酶是从牛、猪、羊的胰脏提取，通过多重结晶方式纯化，并进一步采取层析及超滤技术制备而得。该酶易溶于水，不溶于、乙醇、等有机溶剂。在ph1.8时，酶短时间煮沸几乎不失活，在碱溶液中加热则会变性沉淀。ca2+对酶有保护和激活作用，胰蛋白酶的等电点为ph10.1。胰蛋白酶作为肽链内切酶，对精氨酸和赖氨酸肽链具有选择性水解作用。早期的胰蛋白酶在生物制药领域的主要应用是胰岛素的生产，很快也在其他细胞培养领域应用起来。动物胰酶普遍用于血清培养，不同细胞加入的酶浓度不一样。
应用范围
胰岛素、灭活疫苗生产
组织细胞分离及培养
临床外科使用
食品行业加工助剂
重组胰蛋白酶
理化性质
重组胰蛋白酶是一种使用基因工程技术生产的酶，具有稳定性好、纯度高、无动物来源的优点。市场主流的重组胰蛋白酶是利用dna重组技术在大肠杆菌或酵母中表达的重组猪胰蛋白酶，其氨基酸序列与猪胰蛋白酶一致，具有与天然胰蛋白酶相同的活性和特异性。其由223个氨基酸构成，含有6对二硫键。该酶包含两种胰蛋白酶活性形式：α-胰蛋白酶和β-胰蛋白酶。其活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如pmsf和tlck等、金属离子螯合剂如edta等的抑制。重组胰酶用于无血清培养，同胰蛋白酶一样，不同细胞加入的酶浓度不一样。
应用范围
疫苗和重组胰岛素生产
细胞分析的组织样本制备
免疫细胞治疗
生物药物生产
蛋白质序列、结构及组学研究
02质量要求区别
分类
胰蛋白酶
重组胰蛋白酶
重组胰蛋白酶（质谱级）
来源
取自牛、猪、羊的胰脏
大肠杆菌或酵母重组表达
毕赤酵母重组表达
安全性
潜在病原污染
无外源性病毒污染
无外源性病毒污染
纯度
1：250胰蛋白酶溶液中90%以上为杂质
高纯度（β-trypsin≥70%，
α-trypsin≤20%）
高纯度（β-trypsin>80%，
α-trypsin<20%）
糜蛋白酶
每2500单位胰蛋白酶中不得多于50单位的糜蛋白酶。
无糜蛋白酶等杂酶污染
无糜蛋白酶等杂酶污染
比活
/
≥3800usp units/mg 蛋白
>6800uspunits/mg蛋白
消化效果
不稳定
消化能力强，酶用量少
消化能力强，酶用量少
自切率
容易自切产生自身自切片段影响质谱分析结果
容易自切产生自身自切片段影响质谱分析结果
经过特殊处理保证其不自切
同时，药典级别的重组胰蛋白酶要求微生物的菌落总数不超过100cfu/ml，宿主蛋白质残留量不超过0.01%，外源性dna残留量不超过10ng/mg。由上表可以看出，相比传统动物源提取的胰蛋白酶，重组胰蛋白酶在活性、纯度以及无动物源性等方面优势更为明显，更符合生物制药行业发展趋势。在国家政策层面上，2019年9月国家药监局发布的《疫苗上市后生产工艺变更研究技术指导原则》(征求意见稿)指出，在疫苗生产过程中，鼓励企业进行无动物源原辅料的变更，应尽可能避免使用人源或动物源性原材料。2020年版《中国药典》增加了重组胰蛋白酶标准，推动我国非动物源性生物药物的研发，因此重组胰蛋白酶已逐渐成为更高标准、更高要求的生物制药。翌圣生物在重组胰蛋白酶领域不断创新，不仅推出满足2020版中国药典要求的重组胰蛋白酶，最新推出的重组胰蛋白酶（质谱级）活性更高，优于进口同类产品，其中β-trypsin的hplc含量可达80%以上（高于2020版中国药典标准≥70%），储存稳定性高，蛋白质组学酶解漏切率比进口产品低50%。
03细胞分离及基因表达水平区别maarof manira[1]等人研究了不同胰酶对皮肤细胞培养的影响。在这项研究中，全层人皮肤经过胶原酶消化后释放成纤维细胞，分别使用胰蛋白酶edta溶液（te）和重组胰蛋白酶溶液（ts）处理细胞，发现在细胞的培养扩增过程中，用te或ts处理的人角质形成细胞和成纤维细胞的总细胞产量相当（见图1）；通过定量rt- pcr和免疫细胞化学方法（icc）分析te和ts对i型胶原（col-i）、iii型胶原（col-iii）、细胞角蛋白10（ck10）和细胞角蛋白14（ck14）的基因和蛋白表达水平影响，发现与te相比，ts除col-iii外的皮肤特异性基因表达更高，蛋白表达水平相似（见图2,4）。研究数据反馈，重组胰蛋白酶（ts）表现出更温和的消化效果，能够保持高细胞活力和细胞产量。
04产品列表产品名称
货号
规格
perfcell™ trypsin-edta (0.25%), phenol red 胰酶-edta溶液（0.25%），无酚红
40123es60
100 ml
perfcell™ trypsin-no edta (0.25%), no phenol red 胰酶-无edta溶液（0.25%），无酚红
40124es60
100 ml
perfcell™ trypsin (0.25%), phenol red 胰酶溶液（0.25%），含酚红
40126es60
100 ml
perfcell™ trypsin-edta (0.25%), phenol red 胰酶-edta溶液（0.25%），含酚红
40127es60
100 ml
trypsin 1:250(powder) 胰蛋白酶1:250(粉末)
40101es25
25 g
perfcell™ recombinant trypsin（powder）重组胰蛋白酶（粉末）
40512es10/60
10 mg/100 mg
recombinant trypsin（ms-safe）重组胰蛋白酶（质谱级）
20416es60
100 µg
perfcell tryzyme™express 酶 (1x)，含酚红
40134es60
100 ml
perfcell tryzyme™express 酶 (1x)，无酚红
40135es60
100 ml
参考文献：
[1]manira m,khairul anuar k,seet wt,ahmad irfan aw,ng mh,chua kh,mohd heikal my,aminuddin bs,ruszymah bh.comparison of the effects between animal-derived trypsin and recombinant trypsin on human skin cells proliferation,gene and protein expression.cell tissue bank.2014 mar;15(1):41-9.