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RIPA Buffer配制

1. 基础成分
tris-hcl(缓冲液成分,防止蛋白变性)
nacl(盐份,防止非特异蛋白聚集)
np-40(非离子去污剂,提取蛋白;用h2o配制成10%储存液)
去氧胆酸钠(离子去污剂,提取蛋白;用h2o配制成10%储存液;避光保存)
注意:准备激酶(致活酶)实验时,不要加去氧胆酸钠,因为离子型去污剂能够使酶变性,导致活性丧失。
2. ripa蛋白酶抑制剂
苯甲ji 磺酰氟(pmsf)(用异丙醇配制成200 mm的储存液,室温保存)
edta(钙螯合剂;用h2o配制成100 mm的储存液,ph 7.4)
亮抑酶肽(leupeptin)(用h2o配制成1 mg/ml的储存液,分装,-20℃保存)
抑蛋白酶肽(aprotinin)(用h2o配制成1 mg/ml的储存液,分装,-20℃保存)
胃蛋bai 酶抑制剂(pepstatin)(用甲醇配制成1 mg/ml的储存液,分装,-20℃保存)
3. ripa磷酸(酯)酶抑制剂
激活的na3vo4(用h2o配制成200 mm的储存液
naf(200 mm的储存液,室温保存)
注意:在准备做磷酸(酯)酶实验的时候,不加磷酸酯酶抑制剂。
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