酶诱导是指细胞在底物影响下进行特定酶合成量增加的作用。药物代谢主要发生在肝脏和肠道。其中肝脏代谢主要由位于肝细胞滑面内质网的细胞色素p450（cytochrome p450，cyp）催化，少部分由非cyp酶（如ugt酶）催化代谢。据统计，临床上超过90%的药物由cyp450酶代谢。
part.01 cyp450酶诱导机理及试验方法
现已证明cyp450酶表达受孕烷x受体 (pxr)、组成型雄烷受体 (car)、芳烃受体（ahr）等核受体调控。这3个核受体均为转录因子，当与配体结合激活后，核受体会从细胞质转入细胞核中。其中，pxr和ahr分别与细胞核内的视黄醛x受体（rxr）和转运蛋白（arnt）形成异源二聚体，进而结合在相应靶基因上（如cyp酶），调节cyp酶的表达。ahr参与cyp1a2的诱导；pxr主要参与cyp3a4的诱导，其次是2c亚家族；car与pxr的诱导谱非常重叠，此外有研究表明car还可以诱导cyp2b6。因此，在药物早研期间，可只评估cyp1a2，cyp2b6 和 cyp3a4的诱导作用。
由于cyp酶诱导的试验是从“转录”、“翻译”、“蛋白质翻译后修饰”直至成为活性cyp酶蛋白，所以cyp酶试验系统必须是肝细胞而非其亚结构如肝微粒体或肝s9。随后在cyp450酶诱导试验时，通常需要结合酶活性和mrna两个水平上的结果做结论。当仅做酶活性试验时，若药物同时存在酶抑制现象时，可能会掩盖诱导作用；而测量mrna水平则能更真实地反应诱导源头上的效应，且更为敏感，直观地避免了酶活性检测存在的问题。
鉴于此，为满足客户精准地了解其早研药物的酶诱导作用，iphase技术人员成功研发人cyp450酶诱导表达检测试剂盒（sybr法）！
part.02 iphase产品
iphase作为创新药体外研究生物试剂，技术人员以sybr染料法，采用δδct-定量pcr的方式检测cyp1a2、cyp2b6和cyp3a4这三个cyp酶基因经奥美拉唑、苯巴笔脱和利福平诱导后其mrna水平的变化，发现其mrna倍数变化均显著增加，满足药物相互作用指导原则，说明iphase人cyp450酶诱导mrna水平检测试剂盒（sybr法）能够满足客户在mrna水平上进行酶诱导实验。
iphase人cyp450酶诱导mrna水平检测试剂盒（sybr法）提供给客户提供进行qpcr试验的扩增试剂，cyp1a2、cyp2b6和cyp3a4这三个cyp酶基因以及一个内参基因gapdh的特异性引物。经验证，iphase所提供的特异性引物扩增效率高，且熔解曲线无杂峰，满足客户的试验需求。
图1.cyp1a2引物扩增效率图
注：r2=98.4%；eff%=106.401%
（r2越接近100%扩增效率越好；eff扩增效率越接近90%~110%越好，下同）
图2.cyp2b6引物扩增效率图
注：r2=98.5%；eff%=95.791%
图3.cyp2b6熔解曲线图
图4.cyp3a4熔解曲线图
图5.内参基因gadph标准曲线图
iphase/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者咨询。
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