dapi配置方法
dapi是一种可与dna的小沟结合的细胞渗透性荧光探针，它可与双链dna结合，发出蓝色荧光，荧光强度是自身的20倍。琼脂糖凝胶电泳dna的染色中dapi的染色效果是溴化乙淀的数倍。dapi也能对rna染色，染色机理是其可以选择性嵌入“au序列”并发出荧光。
dapi常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。尽管dapi不能通过活细胞膜，但却能穿透扰乱的细胞膜而对核染色。dapi具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体dna，叶绿体dna，病毒dna，支原体dna以及染色体dna。
dapi-dna复合物的最大激发光为364nm，最大发射光为454nm。dapi水溶液在349nm处和263nm处有吸收峰。它可以与荧光素二乙酸酯结合使用用于成熟花粉粒细胞核的活体染色。
使用方法：
1. 配制方法：用1ml ddh2o将dapi溶解，制得2.9mm的dapi溶液(1mg dapi/1ml h2o)。取适量dapi水溶液加到pbs或双蒸水中，制备成10～50µm的dapi工作液。
注：dapi不能直接用pbs等缓冲溶液溶解，需要先用水将其溶解。
2. 使用浓度：0.5-10 μg/ml
3. 使用方法：
a：固定的细胞或组织染色：
1) 对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。dapi染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行dapi 染色。
2) 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量dapi染色液，覆盖住样品即可。
3) 对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
4) 吸除dapi染色液，用tbst、pbs或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
5) 用带有360nm激发波长，460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。
b：活细胞或组织染色：
1) 细胞培养物中加入适量dapi染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于6孔板一个孔需加入1 ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μl染色液。
2) 在 37℃培养细胞 10～20 分钟。
3) 用 pbs或合适的缓冲液洗细胞两次。
4) 用带有360nm激发波长，460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。
储存温度：2-8℃干燥避光保存。
关键词：染色机 荧光显微镜 流式细胞仪 显微镜