胃癌是我国见的恶性肿瘤之一，在国家癌症中心发表在《中国肿瘤》杂志上，关于 2013 年中国恶性肿瘤发 病和死亡分析的报告中指出，我国 2013 年胃癌发病率为 42． 7 /万，排在所有肿瘤的第 2 位; 死亡率为 30． 1 /万，排在 所有肿瘤的第 3 位。肠上皮化生( intestinal metapalsia，简称 im) 以及上皮内瘤变( intraepithelial neoplasia，简称 ien) 是 胃炎向胃癌转化的“黄金转折点”，此时，更需要积极的治疗。
1 材料
1． 1 动物
选取健康的 spf 级雄性 wistar 大鼠 120 只，体 质量均为( 200 ± 20) g，所有大鼠均由黑龙江中医药大学的 动物实验中心所提供，许可证号: syxk( 黑) 2013 － 012。实 验动物饲料由黑龙江中医药大学动物实验中心提供，饲料 分为两种，分别是普通饲料以及含 0． 3 g /kg *的标 准饲料。
1． 2 药品与试剂
欣胃颗粒: 由黄芪、石斛、三棱、半枝莲 等药物组成，所有中药材均购自于哈药集团世一堂中药饮 片有限责任公司。欣胃颗粒的冻干粉均为黑龙江中医药大 学中医药研究院所提供，具体制备得方法如下: 将欣胃颗粒 中各种药物根据原方比例相混合，加 10 倍量的水浸泡 30 min，回流提取 1 h，经处理后，过滤后的滤渣再加 8 倍量水 回流提取 1 h，过滤，合并两次滤液，最后浓缩。经冷冻干燥 ( 制备工艺如下: － 40 ℃制冷，－ 20 ℃ 保冻 2 h，－ 10 ℃ 保 冻 16 h，20 ℃干燥5 h，35 ℃二次干燥2 h) ，制成冻干粉，分 装，密封后 4 ℃避光保存。每 1 g 冻干粉含欣胃颗粒生药 量 16． 34 g。胃复春: 由红参、香茶菜、枳壳等药物组成，由 杭州胡庆余堂药业有限公司生产，0． 36 g /片，国药准字 z，60 片/瓶。用前研碎，加蒸馏水配置成 0． 032 g / ml 的混悬 液。n － 甲 基 － n’－ 硝 基 － n － 亚 ( mnng) : 日本东京化成工业株式会社批号: zg4t1 － fp; aps、dtt、bis － acrylamide: 美 国 amresco 公 司; dl2000 dna marker、primescript tm ｒt reagent kit with gdna eraser、 sybｒ premix ex taqtm ii ( tli ｒnaseh plus) ，ｒox plus: takaｒa( 宝生物) 工程有限公司; 2，4，6 － 三硝基酚: 台山市 化工厂有限公司; 生理盐水; 哈尔滨三联药业有限公司; 兔 抗多 克 隆 一 抗: 北 京 博 奥 森 生 物 技 术 有 限 公 司; 二 抗 pv6001、dab 显色剂: 北京中杉金桥生物有限公司; 蛋白酶 抑制剂: 瑞士 ｒoche 公司; 引物合成: 美国 invitrogen 公司; 5 × 还原样品缓冲液: beyotime 生物科技有限公司; bca 蛋 白定量试剂盒: beyotime 生物科技有限公司; 蛋白抽提试 剂、2 mg /ml bsa 标准品: beyotime 生物科技有限公司。
1． 3 仪器
al104 型电子天平、al204 型电子天平: 意大 利梅特勒公司; abi7500 荧光定量 pcｒ 仪: 美国 applied biosystems 公司; centrifuge 5415d 离心机: 德国艾本德 eppendorf 公 司; fresco 低 温 冷 冻 离 心 机、multiskan3 酶 标 仪、nanodｒop 2000 分光光度计: 美国 thermo scientific 公司; mini p － 4 电泳槽: 北京凯元信瑞仪器有限公司; moticam3000 摄影显微镜: 美国 moticam 公司; ql － 902 涡旋振 荡仪: 江苏其林贝尔仪器有限公司; ｒm2135 病理组织切片 机: 德国 leica vltｒacut 公司 wd900 型格兰仕微波炉: 广东顺德电器有限公司; 液氮生物容器: 成都金凤液氮容器 有限公司; － 80 ℃ 低温冰箱: 美国 thermo 热电公司; tanon 1600 凝胶成像系统: 上海天能科技有限公司; 电热恒温干 燥箱: 上海一恒科学仪器有限公司; 电热恒温水浴锅: 上海 博迅实业医疗设备厂; 电动组织匀浆器: 美国 sigma 公司; 湿转电泳槽: 北京凯元信瑞仪器有限公司; 电泳仪: 美国 bio － ｒad 公司; 水平脱色摇床: 江苏其林贝尔仪器有限公 司; 半干槽: 美国 bio － ｒad 公司; 酸度计 ph211: 意大利 hanna 公司。
2 方法
40 只健康雄性 wistar 大鼠根 据体质量编号，根据随机数字表法将其随机分为 4 组，即空 白对照组( n，n = 10) 、欣胃颗粒组( x，n = 10) 、胃复春对照 组( w，n = 10) 、模型对照组( m，n = 10) 。先将 40 只健康的 雄性 wistar 大鼠适应性喂养 7 d，并观察大鼠的状态，在无 异常情况的状态下，可以将其纳入实验。除 n 组以外，其 余 3 组大鼠均参与造模，动物造模采用以 n － 甲基 － n’－ 硝基 － n － 亚( mnng) 为基础的多因素复合造模 法，具体造模方法如下: ①含 0． 3 g /kg *的标准饲 料喂养; ②60 ℃浓度为 150 g /l 的热盐水每天 10 ml/kg· d 灌胃; ③浓度为 100 μg /ml mnng 溶液装入涂有黑漆的 避光饮水瓶内作为饮料自由饮用，每 24 h 新鲜配制并更换 1 次，造模期间不再给予其它饮水; ④配合饥饱失常法( 2 d 饱食，1 d 禁食) ，造模 16 周结束后随机抽取 m 组大鼠 4 只 做胃黏膜病理组织学检查，确认模型成功后全部停止造模 药物。n 组每只以等量生理盐水灌胃，清洁自来水自由饮 用，普通饲料喂养。参照《药理实验方法学》对于 任何体质量动物的等效剂量直接折算法进行换算，在大鼠 造模的同时各给药组即给予相应药物干预。x 组: 给予欣 胃颗粒冻干粉 4． 30 g /kg 灌胃给药，每天 1 次，至模型制备 成功; w 组: 胃复春 0． 39 g /kg，灌胃给药，每天 1 次，直至模 型制备成功。n、m 组: 给予同等体积的蒸馏水，灌胃给药， 每天 1 次，直至模型制备成功。模型制备成功后，所有大鼠 禁食不禁水 24 h，然后全部注射后处死，处死后的大鼠 迅速剖腹取胃，沿胃大弯将其剪开，用预冷的 0． 01 mol /l pbs 进行漂洗，将漂洗干净的胃组织平铺于冰盘上，肉眼观 察了解胃黏膜变化情况后，于胃窦部剪取胃组织 2 块，液氮 处理后将其置于 － 80 ℃ 超低温冰箱统一保存，之后进行 western blot 检测。另在大鼠胃窦部位剪取部分胃组织，迅 速置于 4% 多聚*中固定，光学显微镜下观察了解 胃黏膜病理形态学变化情况并进行免疫组化检测。
3 结果
造模及药物干预过程 m 组 大鼠抽检 4 只，死亡 4 只; x 组大鼠死亡 3 只、w 组大鼠死 亡 3 只，n 组大鼠无死亡; 共计死亡 10 只。其中 2 只大鼠 死亡时解剖发现肺部的大量瘀血，因此我们认为是灌胃不 当所致; 有 2 只大鼠在死亡前腹胀明显，体质量有明显减轻 且喜蜷缩在角落，解剖后发现多为肠胀气; 有 4 只大鼠具有 明显的喘息音，口鼻处常伴有黏液或血性的分泌物，经解剖 后确诊为肺感染; 另外有 2 只大鼠死亡原因不明。
4 讨论
由于祖国医学并没有对应 plgc 的病名，所以现代医 家根据其相关症状，把 plgc 归于“胃痞”的范畴。导师谢 晶日教授经过多年的临床实践和实验研究，并根据目前的 社会特点，提出观点: 饮食不节与情志不畅是当下导致本病 的最重要的病因。同时，随着人们生活节奏的加快，压力骤 增，木郁克土，则易生本病。以上两种因素随病因不同，但 殊途同归都是由于，脾虚日久，耗伤胃阴，气阴两虚，鼓动滋 养乏力，血行不畅、胃络瘀血、瘀而化热，内生热毒，终成气 阴两虚夹瘀夹毒。