280nm的光吸收法:
用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0 mg/ml。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(bsa)。
标准曲线的测定:
取6支试管，按下表编号并加入bsa(1.0 mg/ml)0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，用蒸馏水补体积至5.0 ml;测定a280 :用第1管为空白对照，各管溶液混匀后在紫外分光光度计上测定吸光度a280，以a280为纵坐标，各管的蛋白质浓度或蛋白质量(mg)为横坐标作图，标准曲线应为直线。
利用此标准曲线，根据测出的未知样品的a280值，即可查出未知样品的蛋白质含量。
280 nm和260 nm的吸收差法：
核酸对紫外光有很强的吸收，在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克)，但核酸在260 nm处的吸收更强，其吸收高峰在260 nm附近。核酸260 nm处的消光系数是280 nm处的2倍;而蛋白质则相反，其280 nm的紫外吸收值大于260 nm的吸收值。通常:
纯蛋白质的光吸收比值:a280/a260 =1.8
纯核酸的光吸收比值:a280/a260= 0.5
含有核酸的蛋白质溶液，可分别测定其a280和a260，由此吸收差值，用下面的经验公式，即可算出蛋白质的浓度。
蛋白质浓度=1.45×a280 - 0.74×a260 (mg/ml)
215 nm与225 nm的吸收差法：
蛋白质的稀溶液由于含量低而不能使用280 nm的光吸收测定时，可用215nm与225 nm吸收值之差，通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。
用已知浓度的标准蛋白质，配制成20~100 mg/ml的一系列5.0 ml的蛋白质溶液，分别测定215 nm和225 nm的吸光度值，并计算出吸收差:
吸收差d= a215 - a225
以吸收差d为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘出标准曲线。再测出未知样品的吸收差，即可由标准曲线上查出未知样品的蛋白质浓度。
肽键测定法：
蛋白质溶液在238 nm处的光吸收的强弱，与肽键的多少成正比。因此可以用标准蛋白质溶液配制一系列50~500 mg/ml已知浓度的5.0 ml蛋白质溶液，测定238 nm的光吸收值a238，以a238为纵坐标，蛋白质含量为横坐标，绘制出标准曲线。未知样品的浓度即可由标准曲线求得。