mrna：即messenger rna 信使rna是由dna经由转录而来，带着相应的遗传讯息，为下一步转译成蛋白质提供所需的讯息。在细胞中，mrna从合成到被降解，经过了数个步骤。在转录的过程中，第二型rna聚合酶从dna中复制出一段遗传讯息到mrna前体pre-mrna上。在原核生物中，除了5'加帽之外mrna并未被进一步处理而经常是边转录边转译。在真核生物中，转录跟转译发生在细胞的不同位置，转录发生在储存dna的细胞核中，而转译是发生在细胞质中。
一、文库类型
根据研究对象不同选择相应的建库方法
在测mrna过程中，首先要去除rrna。以人为例，在抽提的总rna中，95%的rna是rrna，2%的rna是mrna，剩下的则是lncrna、microrna、sirna等。rrna整个人类当中是非常保守的，在各个组织器官中也是非常稳定的，因此这些测序结果对我们的研究是没有用处的。mrna则是rna中比较重要的部分。
二、建库流程
illumina、kapa公司的truseq rna建库方法是应用广泛的一种，真核普通转录组为例：
首先以mrna的poly(a)(高等生物*的)这个特点，让带有poly(t)探针的磁珠与总rna进行杂交，使mrna和磁珠相结合在一起。接着回收磁珠，将带有poly(a)的mrna从磁珠上洗脱下来。
然后用镁离子溶液将洗脱下来的mrna打成片段，被打断的mrna片段用随机引物逆转录出链的cdna，再合成出第二链，这样就有了双链cdna。对双链cdna末端修复，加a加接头。片段选择，pcr扩增、纯化（如果样本中存在污染物，则需要结合试剂盒进一步纯化）。
注：
这个建库方法对mrna的完整性有较高要求，因此如果mrna发生降解，那么磁珠只能吸附靠近3’端的mrna断片，会在富集阶段被洗脱，导致后数据有一定的偏差（在rna测序质控时就能发现mrna的3’端以及5’端是否有偏移）。
一般在会测序前对总rna进行一次质检，根据电泳质检结果中的18s和28s（rrna）两个峰的高度以及峰的尖度来判断rna的质量，峰越高越尖（rin > 8.0）表示rna的完整度越好。除了mrna普通文库构建外，还有真核链特异性文库、lncrna文库、smallrna文库等。针对一些ff(formalin-fixed)样本和ffpe(paraffin-embedded)石蜡包埋样本以及原核生物的总rna中去除rrna，不适合用上述mrna建库方法。需要结合ribozero、ribominus等来去除，其实是针对rrna序列进行杂交捕获去除的原理来去除的。
oligo(dt)30磁性微球是基于碱基互补配对原则以及mrna含有poly(a)尾巴的特点设计而成，适用于从真核总rna，或直接从细胞、部分病毒、动物和植物组织的粗提物中快速分离完整的高纯度mrna。
磁性微球产品订购信息
产品名称 货号 储存温度 保质期
oligo(dt) 30 磁性微球 ms04t 2-8℃ 2年
truseq standed mrna library prepmrna文库构建试剂盒
kapa mrna文库构建试剂盒适用于illumina测序平台，该试剂盒适用于去除了trna或富含poly(a)的10-400ng rna为模板构建rna文库所需的所有酶和缓冲液。
产品应用：
基因表达；新的转录本和snp鉴定；拼接位点及基因融合识别。产品优势
减少样品手动操作及总的时间从100ng ~ 4ug 的灵活dna样本量kapa hifi酶在文库扩增中有强有力的表现试剂及反应体系便于自动化操作kapa试剂盒产品订购信息
品牌 货号 名称 规格
kapa kk8420 kapa stranded mrna-seq library preparation kit -illumina平台 24sample
kapa kk8421kapa stranded mrna-seq library preparation kit -illumina平台 96sample
truseq链式mrna文库制备试剂盒以精简、经济及可扩展的方式对mrna-seq进行文库制备，可测量链取向。准确测量基因和转录本丰度，并检测编码转录组中的已知特征和新特征。
产品英文名称：truseq® stranded mrna library prep
产品中文名称：truseq链式mrna文库制备试剂盒
illuminatruseq链式mrna文库制备试剂盒特点
truseq链式mrna文库制备试剂盒为编码转录组分析提供了一个精简、高性价比且可扩展的解决方案。它与多种样本兼容。
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此试剂盒可让您测量mrna链方向性以检测反义转录本，并为您增强转录本注释和提高比对效率。其提供高度均匀的覆盖能力，可更好地发现可变剪切、基因融合和等位基因特异性表达等特征。
性价比高
链信息可让您识别rna转录本来自于2条dna链中的哪一条。此信息提高了转录本注释的可信度，尤其针对非人类样本。识别链起源可增加比对片段百分比，从而降低每个样本的测序成本。
可扩展
该试剂盒能可靠检测标准和低质量样本，且其工作流程可与众多不同的研究设计兼容
illumina truseq® stranded mrna library prep产品订购信息
品牌 货号 名称 规格
illumina 20020594 truseq® stranded mrna library prep 48 samples
illumina 20020595 truseq® stranded mrna library prep 96 samples
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