pcr( polymerase chain reaction)-聚合酶链式反应,可以选择性扩增一段dna序列。其基本步骤是,首先将待扩增的模板dna变性使之成为单链,dna样品中,特异性的引物能够与其互补的序列杂交,在dntps和taq酶存在时,就可以合成模板dna的互补链,反应完成后,将反应混合物加热使dna双链变性,温度下降后,过量的引物又可以开始第二轮的合成反应。这种延伸-变性-退火-延伸的循环可以重复多次,使所需要的dna片段得到特异性的扩增。
1. 变性:加热使模板dna在高温下(94℃)变性,双链间的氢键断裂而形成两条单链.
2. 退火:使溶液温度降至50~60℃,模板dna与引物按碱基配对原则互补结合.
3. 延伸:溶液反应温度升至72℃,耐热dna聚合酶以单链dna为模板,在引物的引导下,利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸(dntps),按5ˊ→3ˊ方向复制出互补dna。
上述3步为一个循环,即高温变性、低温退火、中温延伸3个阶段。从理论上讲,每经过一个循环,样本中的dna量应该增加一倍,新形成的链又可成为新一轮循环的模板,经过25~30个循环后dna可扩增106~109倍。