去pcr产物中引物二聚体的方法,包括:1)采用超滤离心法对pcr产物进行纯化;2)使用磁珠法对1)中获得的产物进行纯化,以进一步去引物二聚体;其中,所述pcr产物和引物二聚体的大小差值为20bp~170bp。
目前,在高通量测序的文库构建时通常采取磁珠法(例如,cn107236726a和cn106701737a),其原理为:加入不同体积比例的磁珠试剂会吸附不同片段大小的dna,当加入磁珠体积越少时,吸附的大片段越多。因此,当pcr产物片段与引物二聚体大小相差较大(例如180bp)时,磁珠法在去除蛋白质、盐离子等杂质的同时也能够去除引物二聚体;而当pcr产物与引物二聚体大小相差不大时,磁珠法虽然仍能够去除杂质,但却无法将pcr产物和引物二聚体很好地区分开来,因而纯化效果不佳。有鉴于此,在本领域中存在对大小差距不大的pcr产物与引物二聚体进行有效分离的强烈需求。
pcr扩增过程中往往会产生引物二聚体,而这些引物二聚体导致非特异性扩增,且会参与到文库构建以及后续的测序中。在测序时,过多的引物二聚体会占用测序通量,从而增加测序成本,因此在pcr扩增后去除引物二聚体是非常必要的。目前去除引物二聚体的方法主要采用的是磁珠法、割胶回收等方法。