elisa试剂盒抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的旷地空闲，就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲，从而排斥在elisa其后的步骤中干扰物质的再吸附。
包被用抗原或抗体的浓度，包被的温度和时间，包被液的ph等应根据试验的特点和材料的性质而选定。通常在elisa板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置过夜，37℃中保温2小时被以为具有平等的包被效果。特别是用单抗腹水直接包被时，因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面，业已起到了类似剂的作用。并非所有的elisa固相均需，不当反而会使阴性本底增高。elisa试剂盒脱脂奶粉也是一种良好的剂，其zui大的特点是价廉，可以高浓度使用（5%）。抗体和蛋白质抗原一般采用ph9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也有用ph7.2的磷酸盐缓冲液及ph7~8的tris-hcl缓冲液作为稀释液的。
elisa试剂盒高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作剂使用，但因为奶粉的成份复杂，而且后的载体不易长期保留，因此在试剂盒的制备中较少应用。elisa试剂盒的手续与包被相类似。一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操纵时洗涤*，不经也可得到满足的结果。是否必要，取决于elisa的模式及详细的实验前提。
（blocking）是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。包被好的elisa板干燥后放入密封袋或锡袋中，在低温可保留数月。elisa试剂盒包被的zui适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化，每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。但在间接法测定中，一般是不可少的。
elisa试剂盒zui常用的剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明胶作为剂的。一般蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。