引言
*(liposoluble vitamins) 包括*、*、 *、*，不溶于水而溶于脂肪及有机溶剂，由长的碳 氢链或稠环组成的聚戊二烯化合物。维生素是维持身体健康所必需 的一类有机化合物。这类物质在体内既不能是构成身体组织的原 料，也不是能量的来源，而是一类调节物质，在物质代谢中起重要 作用。*：维持正常视觉，维持上皮细胞、组织完整，增强 机体免疫力，参与铁代谢；*：抗氧化、清除自由基，保护 神经功能，增强机体免疫力，维持正常生育功能；*：维持 骨骼发育，调节抗原提呈细胞的分化、淋巴细胞的增值，影响免疫 力、智力发育；*：参与*的合成，参与骨钙素的合 成。
本方法首先采用液液萃取方法对生物样本进行前处理，然 后sciex液相色谱串联质谱系统系统，以待测目标物的同位素 标记物为内标，检测人血清中* (va)、25-羟基维生素 d2（25ohvd2）、25-羟基*3（25ohvd3）、* （ve）、*1 (vk1)。
实验部分
样品处理：向1.5 ml ep管中，依次加入10 μl内标工作液(表 2)、50 μl全血和140 μl甲醇；涡旋20秒，混匀；再加入0.6 ml正己 烷，3,000 r/min涡旋100 s，然后10,000 rpm离心3分钟；取离心后 的上清液，在氮气下吹干。残渣用100 μl 80%甲醇复溶、离心， lc-ms/ms进样20 μl分析。
色谱条件：
色谱柱使用phenomenex kinetex c18 column (50×3.0 mm,2.6 μm）进行分离，流动相选用水（含0.1% 甲酸）作为a相，和 甲醇（含0.1% 甲酸）作为b相，柱温设为40 ℃，进样量为20 μl； 进行梯度洗脱，液相梯度见表2。
质谱条件：
使用sciex triplequad™ 4500md质谱系统。采用heated nebulizer（apci）和多反应监测（multiple reaction monitoring， mrm）模式进行质谱扫描。离子源参数：加热气（gs1）为 60 psi，脱溶剂气温度为550 ℃；气帘气（curtain gas，cur） 为35 psi，碰撞气（collision gas，cad）为6 psi；雾化器电流 （nebulizer current, nc)：5 μa。为了获取较好的稳定性和灵敏度，各化合物监测离子对的去簇电压（declustering potential， dp）和碰撞电压（collision energy，ce），目标物定量离子对、定 性离子对以及内标物监测离子对等参数均经过系统优化，离子对信 息见表3。
结果与讨论
图1 va、25ohvd2、25ohvd3、ve和vk1在定量下限loq提 取离子流图。图2是人全血中va、25ohvd2、25ohvd3、ve和 vk1的提取离子流色谱图，峰型对称，响应良好。
va、25ohvd2、25ohvd3、ve和vk1回归方程和线性范围见 表3，va、25ohvd2、25ohvd3、ve和vk1在相应的浓度范围内 线性良好，r均大于0.996。
为了考察方法的重现性及准确性，分别进行va、25ohvd2、 25ohvd3、ve和vk1的精密度(rsd)和准确度方法验证。从表4可以 看出，va、25ohvd2、25ohvd3、ve和vk1低、中、高浓度的精 密度均在10%以内，准确度均在88-108%之内。
总结
本方法使用sciex 高灵敏度和高稳定性的液相色谱串联质谱系 统，实现了同时检测人全血中va、25ohvd2、25ohvd3、ve和 vk1浓度，本方法可对人全血中*进行快速的定性和定 量分析。该方法具有线性好、准确度高等优点，且每个样本分析仅 需6.5 min，具有较高的分析通量。
来源：sciex中国公司