小麦源性成分探针法荧光定量pcr试剂盒原理简述:
1. taqman荧光探针:pcr扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;pcr扩增时,taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条dna链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与pcr产物形成*同步。而新型taqman-mgb探针使该技术既可进行基因定量分析,又可分析基因突变(snp),有望成为基因诊断和个体化用药分析的*技术平台。
2. sybr荧光染料:在pcr反应体系中,加入过量sybr荧光染料,sybr荧光染料非特异性地掺入dna双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的sybr染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与pcr产物的增加*同步。sybr仅与双链dna进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定pcr反应是否特异。
3. 分子信标:是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近,不会产生荧光。pcr产物生成后,退火过程中,分子信标中间部分与特定dna序列配对,荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
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