什么是rt-pcr?
rt-pcr,反转录·聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction, rt-pcr）是将rna的反转录（reverse transcription ）和cdna的聚合酶链式扩增（pcr）相结合的技术。rt-pcr技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中rna病毒的含量和直接克隆特定基因的cdna序列。
rt-pcr关键原料酶---逆转录酶
逆转录酶主要包括以下三种活性：
①逆转录活性：以rna为模板，催化dntp聚合，生成dna-rna杂合双链。
②rnase h活性：水解杂合双链中的rna，得到与rna互补的dna单链（cdna）。它是病毒生命周期中复制循坏所必需的，能限制逆转录酶的合成长度。
③dna指导的dna聚合酶活性：以cdna单链为模板，以dntp为底物，再合成双链dna。
目前通过深入研究的逆转录酶包含：
▸ 人类免疫缺陷病毒1型的逆转录（pdb：1hmv）
▸ 莫洛尼鼠白血病病毒的逆转录酶（mmlv）
▸ 禽成髓细胞瘤病毒的逆转录酶 （amv）
▸ 维持真核细胞的染色体端粒存在的端粒酶逆转录酶
目前，分子pcr检测常用的两种逆转录酶：amv和m-mlv。总的来说，虽然amv的热稳定性好，对抗二级结构和高gc的能力强，但其合成cdna的长度短，得率低，因此m-mlv是市场主流产品。目前，野生型m-mlv已可以通过基因改造弥补这些不足。
如何选择合适的逆转录酶？---国盛医学m-mlv逆转录酶
逆转录酶是由不同生化活性的不同结构酶组成，其中决定逆转录酶性能的主要取决于它的逆转录活性和rnaseh 活性，而逆转录活性又是和酶的热稳定性密切相关的。国盛医学通过基因工程技术获得了高灵敏变异的全新逆转录酶：
国盛m-mlv
野生型m-mlv
amv
来源
莫洛尼鼠白血病病毒
莫洛尼鼠白血病病毒
禽成髓细胞瘤病毒
热稳定性
高，65℃
差，37-42℃
好，42-55℃
rnase h活性
缺失
弱
强
cdna合成得率
高
较高
低
合成长度
长，可达10kb
长，可达2-3kb
短
对抗复杂结构rna的能力
强
弱
强
f 国盛m-mlv 逆转录酶反转录性能等同甚至优于国际s
f 国盛m-mlv逆转录酶反转录耐高温性能等同甚至优于国际s
现国盛医学推出实时荧光pcr用酶、等温扩增用酶、crispr检测用酶、高通量测序用酶等系列产品的免费试用活动，需要体验请登录国盛医学了解。