钙黄绿素-am (calcein-am)和碘化丙啶(pi)溶液，分别对活细胞和死细胞染色，可同时使用，对活细胞和死细胞进行荧光染色。calcein-am的乙酸甲基酯亲脂性很高，使其可透过细胞膜。尽管calcein-am本身并不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶作用，calcein-am能脱去am基，产生的calcein能发出强绿色荧光(激发: 490 nm，发射: 515 nm)，因此calcein-am仅对活细胞染色。另一方面，作为核染色染料的pi不能穿过活细胞的细胞膜，它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的dna双螺旋从而产生红色荧光(激发: 535 nm，发射: 617 nm)。由于calcein和pi-dna都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发，仅可观察到死细胞。
艾美捷biogradetechcalcein-am/pi，活细胞/死细胞双染试剂盒：
中文名称：calcein-am/pi，活细胞/死细胞双染试剂盒
英文名字：calcein-am/pi, live/dead cell double staining kit
biogradetech货号：b-chk103-500t
规格：500t
保存建议：calcein-am/pi，活细胞/死细胞双染试剂盒保存：-20℃干燥避光 有效期一年。
calcein-am/pi，活细胞/死细胞双染试剂盒使用方法：
以hela细胞染色为例，请注意不同的细胞种类、不同浓度，有不同的观察条件。
1.染色工作液的配制
添加2.5 µl calcein-am储备液（4mm）和12.5 µl pi（2mm）储备液至5 ml pbs中配制成染色溶液。calcein-am的终浓度为2 µm，pi的终浓度为5 µm。
注意：由于calcein-am的稳定性比较差，此染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
2.细胞染色
1)染色hela细胞等贴壁细胞时，先用trypsin-edta等消化细胞，制备成细胞悬液。
2)将细胞悬液离心3分钟(1,000 rpm)。
3)去除上清液，加入pbs缓冲液，细胞数量调整至1×105-1×106个/ml。再用移液器充分混匀。
4)由于培养基中的血清等成分含有酯酶，calcein-am会分解，会导致空白上升，所以需要离心数次，用pbs洗涤数次直到完-全洗净。
5)将200 µl细胞悬液移至小试管中，加入100 µl染色溶液，在37℃下孵育15分钟。
6)在盖玻片上滴加适量的染色的细胞溶液。
7)在荧光显微镜下，先用490±10 nm波长激发，观察黄绿色的活细胞，还可以同时观察到红色的死细胞，然后用545 nm波长激发，能够看到红色的死细胞。