ripa裂解液(强)科研实验使用
ripa裂解液（ripa lysis buffer），其本意是radio immunoprecipitation assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。
本品为裂解强度相对较强的ripa裂解液（强），含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，edta，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的western、ip等实验。
组织样品
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解ripa裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入pmsf，使pmsf的最终浓度为1 mm。
3. 按照每20 mg组织加入150-250 μl裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的page、western和免疫沉淀等操作
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
【注】ripa裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组dna等复合物。在不检测和基因组dna结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如nf-kappab、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
组织样品
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解ripa裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入pmsf，使pmsf的最终浓度为1 mm。
3. 按照每20 mg组织加入150-250 μl裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的page、western和免疫沉淀等操作
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
【注】ripa裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组dna等复合物。在不检测和基因组dna结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如nf-kappab、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
注意事项
1）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
2） 用ripa裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用bca蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（cat no.20201es76）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4）本产品仅作科研用途！