丹磺酰氯如何正确操作
丹磺酰氯是一种与脂肪胺和芳香胺中的伯氨基反应生成稳定的蓝色或蓝绿色荧光磺酰胺加合物的试剂。可用于测定肽链的氨基末端，它能专一地与链n-端α-氨基反应生成丹磺酰-肽，后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很强的荧光，可直接用电泳法或层析法鉴定出n-端是何种氨基酸。用于氨基酸和肽的n末端衍生以及通过反相hplc和其他分析方法检测多胺等。丹磺酰氯也广泛用于修饰氨基酸; 特别是蛋白质测序和氨基酸分析。 它也可以用来标记羟基和羧酸官能团。
产品参数
别名： 丹酰氯，二甲氨基萘磺酰氯，dansyl chloride ，dnscl，5-(dimethylamino)-1-naphthalenesulfonyl chloride，
性状： 橙黄色粉末
cas号： 605-65-2
分子式： c12h12cino2s
分子量： 269.74
纯度： ＞98%
溶解性： 溶于丙酮
用途及描述：科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。用于荧光n端衍生氨基酸和肽的荧光试剂，并通过反相hplc检测。丹酰氯（dnsc）是一种伯胺反应剂，广泛用作荧光试剂，用于氨基酸和肽的n末端衍生以及通过反相hplc和其他分析方法检测多胺等。
实验步骤
1. 标准氨基酸的丹磺酰化
分别称取2 . 3μmol 层析纯的氨基酸, 溶于0 . 5 ml 0 . 2 mol/ l碳酸-氢钠溶液中。取0 . 1 ml 于有塞玻璃试管中, 加入0.1 ml dns-cl 丙酮溶液, 检查ph, 必要时用三乙胺调ph9 . 0～ 9 . 5 ,于室温(25 ℃ 左右) 下放置2～ 4 h。再用无离子水稀释10 倍,贮存于暗处。经层析, 得dns-氨基酸的标准图谱。
2. 蛋白质n-末端氨基酸的dns 化
取0 . 5 mg 蛋白质样品, 置于有塞玻璃管中。用少量水溶解后, 加入0 . 5 ml 0 . 2 mol/ l 碳酸-氢钠溶液。再加入0 .5 mldns-cl丙酮溶液, 用三乙胺调至ph9 . 0～9 . 5 , 塞好塞子, 于40 ℃ 烘箱中反应2 h , 或室温(25 ℃左右)放置2～4 h , 生成dns-蛋白质。
3. dns-蛋白质的水解
dns 化反应结束后, 真空蒸去丙酮, 加入0 . 5 ml 6 mol/ l 盐酸溶解dns-蛋白质。全部移入水解管, 抽真空封管, 于111 ℃烘箱中水解18～24 h。开管后蒸去盐酸, 加少量水, 再蒸干。重复2～3 次以除尽盐酸。
4. dns-氨基酸的抽提
将上述水解产物, 加0 . 5 ml 水, 用1 mol/ l 盐酸调至ph2～3。加入0 . 5 ml 乙酸乙酯抽提, 分层可在细长滴管中进行。重复抽提2～3 次, 将上层抽提液合并于小试管中, 抽去乙酸乙酯,置于干燥器中备用。
5. dns-氨基酸的层析与检测
生成的dns-氨基酸和标准dns-氨基酸分别进行聚酰胺薄膜层析。