您好,欢迎访问一九零五行业门户网

色谱保护柱使用注意事项

色谱柱的使用寿命,除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关外,***主要的是与日常的维护密切相关。色谱柱的使用寿命主要是根据柱效和柱压两个指标来衡量,如果一支色谱柱柱效太低或柱压太高,通常被认为该色谱柱的使用寿命已经结束。因此,延长色谱柱使用寿命的关键是,消除引起柱效下降和柱压升高的因素。以下是色谱柱的日常维护方法:
一. 流动相的ph应在使用范围内
成都摩尔科学仪器有限公司的色谱柱ph范围值能够达到ph1.5-10.5。由于填料中存在si-c和si-o键,流动相超过其ph范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂,使柱效下降,使用寿命变短。由于流动相的ph控制不当而对色谱柱造成的损害,通常很难使色谱柱恢复,因此必须认真对待,严格控制流动相的ph值。
二. 去除样品和流动相中的固体颗粒
样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,筛板被堵不仅会引起柱压的升高,而且也会引起柱效下降,因为筛板的堵塞会引起液流不均,导致色谱峰形拖尾、变宽,从而使柱效下降。因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析前对样品进行针筒过滤,流动相过0.45um滤膜。
三. 使用保护柱或在线过滤器
样品和流动相经过滤后并不能******消除固体颗粒物质,因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质,这些固体颗粒被流动相带入色谱柱,堵塞筛板,导致柱压升高、柱效下降。保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱筛板孔径相同,因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱,有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大比例,因此,除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。成都摩尔科学仪器有限公司提供的每一款色谱柱都有专门的保护柱,并且该保护柱还能够与其他品牌公司的色谱柱通用,如安捷伦,沃特斯,岛津,等等。
如果确认色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的,可选择以下方式进行补救:
1. 先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器,然后用甲醇/水=20/80 1.0ml/min
反向冲洗色谱柱180min。
2. 先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器,然后反向使用。
四. 正确使用缓冲盐
缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,因此缓冲盐使用不当会使其析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升;同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展,使色谱柱的保留能力下降,柱效降低。缓冲盐析出后,去除非常困难,因此,正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。
正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出,因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话:使用前要过渡,使用后要冲洗。具体方法如下:
1. 等度条件:使用缓冲盐前需用过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗30min,
使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2ml/min流速冲洗
色谱柱过夜。
2. 梯度条件:用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗30min;分析完成后,再用该过渡流动相以1.0ml/min冲洗色谱柱45min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出。
注意:过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同,区别只是过渡流动相中不含缓冲盐。
3. 缓冲盐析出的补救方法:
1)方案1:用甲醇/水=20/80以1.0ml/min流速35℃条件下反向冲洗色谱柱120min;
2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。
五. 防止强保留物质在色谱柱中存留
强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积,对样品中的化合物产生额外的保留行为,不仅引起峰形变宽、拖尾,使柱效下降,同时也会引起保留时间的变化,累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应,需要一定的时间才会体现出来,但对许多样品特别是复杂样品而言,很难判断其是否含有强保留物质,因此要防止强保留物质的累积,需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈清洗色谱柱。
清洗方法:
1. 未使用缓冲盐:每天分析完成后,用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。
2. 使用过缓冲盐:分析完成后,先用上述方法除去缓冲盐,然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱60min。
3. 补救方法:
水 —— 乙腈 —— 氯仿(或异丙醇)—— 乙腈 —— 水
每一步以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱60min。
a 色谱柱验收
检查外观是否完好;
检查柱子的规格型号,是否与您的需求相符;
如果您想对新色谱柱的性能进行测试,可以按照柱性能测试报告上的条件进行测试。
b 色谱柱安装
该色谱柱与外径为1/16英寸的peek管线或不锈钢管线******匹配;
为减小死体积,柱前和柱后的管线内径应不超过0.01 英寸(0.25 mm);
如果您使用的是peek管线,您应选择peek接头使管线与色谱柱连接;如果您使用的是不锈钢管线,您可以选择peek接头或不锈钢接头,当使用不锈钢接头时,应确保管线与柱头紧密结合后再固定韧环,这样可以防止管线与色谱柱连接处产生死体积。
c 对流动相的要求
该反相色谱柱,可以使用水或有机溶剂作为流动相,并且为了特殊需要还可以在流动相中加入酸、碱、盐;
该色谱柱不能耐受纯水或纯水溶液,流动相中有机相的比例不应低于5%;
该色谱柱的ph值耐受范围为1.5-9.0,流动相的ph值不应超过这一范围,否则色谱柱性能和寿命会受到影响;
对于缓和流动相,应确保不同溶剂间的良好互容,以免影响分析结果;
对于有机溶剂-缓冲溶液体系,应确保缓冲盐不会析出;
不同流动相的黏度有差别,使用不同的流动相时,色谱柱产生的压强会有差别;使用水(包括缓冲溶液)-乙腈体系时,乙腈含量为20%时产生的压强******;使用水(包括缓冲溶液)-甲醇体系时,甲醇含量为50%时产生的压强******;diamonsil 2的******承受压强远高于反相模式下可能产生的******压强;
在10-40 °c之间,使用较高的柱温能够降低色谱柱压强并改善分离效果;
用于流动相配制的溶剂应为hplc级或更******别,作为添加物的酸、碱、盐尽量使用hplc级别;
色谱柱入口和出口安装了2 μm筛板,为避免色谱柱堵塞,流动相应经0.45 μm滤膜或孔径更小的滤膜过滤;
流动相应该有效脱气后再使用,以避免在系统中产生气泡导致的泵和检测器不稳定;
纯水或缓冲盐水溶液易滋生微生物造成流动相污染,纯水或缓冲盐水溶液作为流动相组分时,24小时内应更换新的溶液。
d 转换流动相的注意事项
您收到的色谱柱是保存在65%乙腈水溶液中的,使用前建议您用甲醇或乙腈对新色谱柱进行活化冲洗;
纯有机溶剂或有机溶剂含量较高的流动相与含缓冲盐的流动相变换,不应直接替换,两者之间应使用10%甲醇水溶液或10%乙腈水溶液进行过渡,过渡溶剂体积不少于10倍柱体积;
用某一种流动相代替上一种流动相时,应确保两者互容;
e 色谱柱保存
超过24小时的时间不使用色谱柱,******将色谱柱保存在乙腈或甲醇中;
操作时的流动相中若无酸、碱、盐,可以用乙腈或甲醇冲洗20倍柱体积后直接封存;操作时的流动相中若有酸、碱、盐,应先用10%甲醇水溶液或10%乙腈水溶液冲洗20倍柱体积,然后再用乙腈或甲醇冲洗,然后封存;
使用随色谱柱一起的peek螺旋塞将色谱柱的入口和出口密封,以防止柱中溶剂挥发。
f 对样品的要求
用于进样的样品溶液须经0.45 μm滤膜或孔径更小的滤膜过滤
如果样品提取自复杂基质(比如动植物基质),******对提取液进行适当的纯化处理,以避免污染色谱柱,影响分析效果和色谱柱寿命
安装保护柱可以防止颗粒物堵塞色谱柱,并预先吸附强保留物质,以避免其污染色谱柱。
g 色谱柱再生方法
当色谱柱压强明显升高时可对色谱柱进行再生处理;用相当于20倍柱体积的溶剂按下列次序冲洗色谱柱:10%甲醇水溶液→甲醇→异丙醇→甲醇。该程序适用于赛分反相色谱柱:c18, c8,等等。如果色谱柱的压力升高是由颗粒杂质堵塞引起,再生处理效果不明显。
柱床体积计算方法:v=3.14*d2*l/4
d为色谱柱内径,单位为cm;l为柱长,单位为cm。
色谱柱规格 150 mm*4.6 mm 200 mm*4.6 mm 250 mm*4.6 mm
柱床体积 2.5 ml 3.3 ml 4.2 ml
成都摩尔科学仪器有限公司提供的产品系列包括:各类食品检测和药品检测涉及的从分析到制备等规格齐全、填料齐全的液相色谱柱、气相色谱柱、 纯化填料、品种规格齐全样品前处理固相萃取柱和免疫亲和柱;检测的色谱柱以及纯化用的系统成套设备和各种填料;同时,成都摩尔科学仪器有限公司也是各品牌色谱柱、仪器的配件耗材(如氘灯、石墨管、单向阀等)、常规实验室消耗品(如针头过滤器(含灭菌器)、过滤膜(含除菌膜)、样品瓶(含顶空瓶)及相关盖垫、 移液器、标准品(食品和环境等)和各种分析检测仪器(如液相色谱仪、气相色谱仪、培养箱、生物安全柜、天平、ph计等综合集成供应商。()
其它类似信息

推荐信息