一,内毒素检测(凝胶法)的原理
酶原内毒素凝固酶
凝固原凝固酶凝固素
革兰氏阴性细菌内毒素催化了lal中酶原的活化。初始活化速率由内毒素的浓度决定。活化后的酶(凝固酶)水解了也存在于lal中的凝血蛋白(凝固原)内的特定化合键。水解后,产生的凝固素自行联合,并形成凝胶状胶块。
凝胶法是一种用于革兰氏阴性细菌内毒素的测试。凝胶法在37℃的水浴或干燥热块中放置的试管中操作。孵育一小时后,将试管翻转180°。凝块牢固地附着在试管底部,表明是阳性反应。如果液体从试管侧面向下流动,则结果是内毒素阴性。
二,检测所需主要设备及材料
试剂
– 鲎试剂(lal)(pyrogent™ 试剂)
– 内毒素工作标准品(cse)
– lal 试剂检查用水(lrw)(# w50-640, w50-100, w50-500)
器具
– 玻璃稀释管,13 × 100 mm(# n207)
– 玻璃反应管,10 × 75 mm(# n201, n205)
– 独立包装的血清吸管(选购)
– 标签
请使用经内毒素试验验证合格的无热原器具。
设备
– 加热块或非循环热水浴
– 移液器
– 计时器
– 漩涡混合器
– 试管架
三,操作步骤
本指南分步描述了如何进行传统凝胶法 鲎试剂(以下简称lal)试验。试验开始前,先使试剂瓶温度与室温相同。
四,注意事项
– 使用配套的lal和cse 试剂
– 建议勿使用塑胶管稀释内毒素
– 遵循所有关于内毒素漩涡震荡次数的建议
– 使用经内毒素试验验证合格的无热原器具
– 使用前,先使试剂温度与室温保持相同
– 不要对lal进行漩涡震荡
– 不要污染样品、标准品、lrw 和器具
– 应正确安装、验证并维护设备仪器,避免影响凝胶形成
五,玮驰相关产品
凝胶法lal试剂盒
品牌 货号 名称 规格 灵敏度(eu/ml)
lonza n283-06 pyrogent™+凝胶法lal试剂盒(有内毒素) 64次测试 0.06
lonza n283-125 pyrogent™+凝胶法lal试剂盒(有内毒素) 64次测试 0.125
lonza n294-03 pyrogent™+凝胶法lal试剂盒(有内毒素) 200次测试 0.03
lonza n294-06 pyrogent™+凝胶法lal试剂盒(有内毒素) 200次测试 0.06
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lal试剂检查用水
品牌 货号 名称 规格
lonza w50-640 lal试剂检查用水 <0.005 eu/ml,30 ml/瓶
lonza w50-100 lal试剂检查用水 <0.005 eu/ml,100 ml/瓶
lonza w50-500 lal试剂检查用水 <0.005 eu/ml,500 ml/瓶
lonza w50-1000 lal试剂检查用水 <0.005 eu/ml,1000 ml/瓶
无热原试管
品牌 货号 名称 规格
lonza n207 无热原试管 30/铝箔包
lonza n201 无热原试管 50/箱
lonza n205 无热原试管 50/铝箔包
吸头
品牌 货号 名称 规格
lonza be25-415 eppendorf® 2-200μl biopur™ 移液管吸头 <0.001 eu/ml,5个托盘/pkg;96个吸头/托盘
lonza be25-417 eppendorf® 50-1000μl biopur™ 移液管吸头 <0.001 eu/ml,5个托盘/pkg;96个吸头/托盘