在加热灭菌前，成分应边搅拌边溶解于水中。高压灭菌的时间取决于培养基中微生物的含量，容器的大小，每个容器中物质的体积和灭菌锅内容器的空间。
在制备时，由于污染的微生物的含量通常很低，所以影响高压时间的主要变量取决于上述其他的几个因素。灭菌时间通常要在121℃下保持15~20min，这个时间从中心温度达到121℃开始计算。可以将热电偶放人灭菌锅内部中心进行测定。
looml的瓶子或烧杯单独放在髙压锅中达到121℃大约需要10min，如果多个瓶子紧挨着放满灭菌锅内的丝悬筐中，瓶子中的物质需要 20min才能达到121℃如果培养基或稀释液的体积很大时，则需要更长的时间；例如单独使用1l的瓶子温度达到121℃时需要20min,如果许多这样的瓶子紧挨着放满灭菌锅内的丝悬筐中，则中心温度要达到121℃需要30mm或更长的时间。为了达到灭菌的目的，它和稀释液进行高压灭菌时，惟一正确的方法是将热电偶放入灭菌锅中测定。
分装在大的容器中时，可能会因为延长灭菌加热时间而造成 热降解。因此在高压灭菌前，先将培养基成分溶解后分装到较小的容器中。
由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。一些需严格灭菌的需要较长时间的贮存，必须放在2~6℃的冰箱内。
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