直扩型taq dna聚合酶说明书
产品详情
taq-d dna聚合酶（klentaq），是大肠杆菌重组表达的嗜热细菌thermus aquaticus来源的外切酶缺失型taq dna聚合酶（删除了5’ 外切酶结构域）。该酶具有5’→3’聚合酶活性，无5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3'-da尾巴。不可用于taqman探针法q-pcr。本酶经基因工程改造，尤其适合于溶解曲线法单核苷酸多态性（snp）分型。扩增片段的长度可达3 kb。延伸速度为1.0 kb/ min（72℃）。
特点
无外切酶活性，适合于溶解曲线法单核苷酸多态性（snp）分型；
热稳定性好：95℃下半衰期超过40 min；
可以掺入dutp、ditp、荧光标记核苷酸；
相比普通taq dna 聚合酶，本酶更加适合未处理的血液、组织、唾液等样本的pcr。
浓度2.5u/μl活性定义
以大马哈鱼精子dna作为模板/引物，在72℃、30 min内，将10 nmol脱氧核糖核苷酸掺入到酸不溶物中所需的酶量，定义为一个活性单位（u）。
酶贮存缓冲液
20 mm tris-hcl (ph 8.0), 100 mm kcl, 1 mm dtt, 0.1 mm edta, 0.5% nonidet p40, 0.5% tween 20, and 50% glycerol。
产品包装规格及组成
component
78dc10011--500u
78dc10011--2500u 78dc10011--10000u 78dc10011--25000u
taq-d dna聚合酶
（klentaq）
500u
500u×5
2500u×4
2500u×10
10×taq-d buffer
1.0 ml×1
1.0 ml×5
5.0 ml×4
5.0 ml×10
运输与保存
-20℃保存 冰袋运输
适用范围
溶解曲线法基因分型/snp测定；
菌落pcr；
ta克隆pcr产物添加3’-da；
dna荧光标记；
血液、组织样本等直扩pcr。
应用举例
以下反应举例为50 μl标准pcr体系， 仅供参考。实际pcr条件应根据模板、引物、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。
组份
体积/μl
终浓度
10×taq-d buffer
5
1×
dntps（2.0 mm）
5
0.2 mm
引物f（10 μm）
1.5
0.3 μm
引物r（10 μm）
1.5
0.3 μm
template
varable*
/
taq-d（2.5u/μl）
1.0
2.5u
ddh2o
varable
/
总体积
50
/
*dna template可参照如下标准（50 μl pcr体系）：
l 人类基因组dna
0.1 μg-1 μg
l λdna
0.5 ng-5 ng
l 质粒dna
0.01 ng-1 ng
l 大肠杆菌dna
10 ng-100 ng
pcr反应条件
95℃
5 min
95℃
15 sec
55~72℃
20 sec
30 cycles
72℃
1-2 kb/min
72℃
5 min
注意事项
不可用于taqman探针法q-pcr。
碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。taq-d dna聚合酶的碱基错误率为1×10-5。
建议在冰上配置pcr 反应液后，再放入pcr仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的pcr结果。
如进行pcr扩增后，除目的条带外，还伴随其他杂带，建议适当减少体系中的酶用量，以增加pcr扩增反应的特异性。
本公司buffer经大量pcr反应实例优化而成，然而对某些pcr反应存在一个最you的镁离子浓度。若需要优化镁离子浓度，请购买本公司不含镁离子的buffer和mgcl2/mgso4。
本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶污染。pcr方法检测无宿主残余dna，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。
室温放置一周，扩增活性无明显改变；但强烈建议不要在室温下长期放置，用毕放回-20度。
货号 品名 规格 品牌
78dc10011-500u 直扩型taq dna聚合酶 500u biohub
78dc10011-500u×5 直扩型taq dna聚合酶 500u×5 biohub
78dc10011-2500u×4 直扩型taq dna聚合酶 2500u×4 biohub
78dc10011-2500u×10 直扩型taq dna聚合酶 2500u×10 biohub