酸性蛋白酶(acp)是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。酸性蛋白酶能够在酸性条件下,催化酪蛋白水解产生酪氨酸,酪氨酸在碱性条件下能够还原磷钼酸化合物生成钨蓝,产物在680nm处具有特征吸收峰,通过吸光值变化即可表征酸性蛋白酶的活性。酸性蛋白酶测定试剂盒的使用步骤:
1、用hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%edta=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3、再加入适量hanks液制成细胞悬液;
4、将待染色细胞稀释至所需浓度;
5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。
酸性蛋白酶测定试剂盒的注意事项:
1、如仪器无本试剂盒要求的波长,请选择接近的波长。
2、不同批次的试剂不推荐混合使用。
3、使用时请做好防护措施并严格执行实验操作规程。且废液按环保要求处理。