β-葡萄糖苷酶（β-gc)活性检测试剂盒说明书
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
规格：100t/48s
产品内容：
提取液：液体 100ml×1 瓶，4℃保存。
微量法
试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 12ml 双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二：液体 15ml×1 瓶，4℃保存。试剂三：液体 15ml×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体 1ml×1 支，5μmol/ml 的对硝基苯酚溶液。
产品说明：
β-gc（ec 3.2.1.21）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-gc 负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-gc 水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味；β-gc 能够水解植物体内野黑樱苷，释放 hcn，从而防止昆虫取食。
β-gc 分解对-硝基苯-β-d-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-gc 活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 1000 万细菌或细胞加入 1ml 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），15000g， 4℃，离心 20min，取上清，置冰上待测。
2、组织的处理：称取约 0.2g 组织，加入 1ml 提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心 20min，取上清，置冰上待测。
3、标准样品的准备：取 100μl 标准液，加入到 400μl 试剂三中，得到 1μmol/ml 标准液，十倍稀释到 100nmol/ml，用蒸馏水倍比稀释：50、25、12.5、6.25nmol/ml。100、50、25、12.5、6.25、0nmol/ml 做标准液。
二、测定步骤
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。
2.加样表
试剂名称（μl）测定管对照管标准管
试剂一120
试剂二150150
样本3030
充分混匀，放入 37℃准确水浴 30min 后，立即放入沸水浴中煮沸 5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）
充分混匀，8000g，4℃，离心 5min，取上清液（在 ep 管或 96 孔板中加入下列试剂）
充分混匀，室温静置 2min 后，400nm 处测定吸光值 a，计算δa=a 测定管-a 对照管。三、β-gc 活力计算：
1、标准曲线建立：根据标准管的浓度（y）和吸光度（减去浓度为 0 标准管的 od 值，x），建立标准曲线。
2、根据标准曲线，将δa（x）带入公式计算样品产物浓度（nmol/ml）。
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-gc 活力(u/mg prot)=(y×v 反总)÷(v 样×cpr)÷t=20×y÷cpr
需要另外测定，建议使用本公司 bca 蛋白质含量测定试剂盒。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织在每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-gc 活力(u/g 鲜重) = (y×v 反总)÷(w×v 样÷v 样总)÷t=20×y÷w
（3）按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
β-gc 活力(u/104 cell)=(y×v 反总)÷(1000×v 样÷v 样总)÷t=0.02×y
cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；v 反总：反应体系总体积，0.3ml；v 样：加入反应体系中样本体积，0.03ml；v 样总：加入提取液体积，1ml；w：样品鲜重，g；1000：细胞或细菌总数，1000 万；t：反应时间，0.5h。
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