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minutetm无表面活性剂的厚壁微生物总蛋白
提取试剂盒
目录号yd-016
描述：
从厚壁微生物中提取蛋白质是实验室常见的实验操作，传统的操作方法非常复杂，冗长，不可
控。本试剂盒提供了一种无表面活性剂，快速，可靠的从厚胞壁微生物提取总蛋白的方法。可
以从酵母，丝状真菌，革兰氏阳性和阴性菌，虫卵，微藻中等提取总蛋白。试剂盒提供了优化
的无表面活性剂和edta的缓冲液。试剂盒所有步骤在单一管内完成，时间＜10分钟，得率可
达2-4 mg/ml.可用于对数生长期和静止生长期微生物。提供的原材料做够做50次提取。
应用：
提取的蛋白可应用于sds-page、wb，ip，elisa，酶活性检测和蛋白质组学分析。缓冲液可以兼容imac
树脂用于his-标签蛋白纯化。
试剂盒组分
1. 20ml缓冲液a
2. 20ml缓冲液b
3. 5g蛋白提取粉
4. 4根1.5ml离心管塑料研磨棒
5. 50个1.5ml离心管
储存：
室温储存
所需附加材料
台式离心机（最大转速14000-16000rpm）
产品重要信息
蛋白酶抑制剂不是必须加入，但是如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后需要保存较长时
间，建议在缓冲液中添加蛋白酶抑制剂。推荐使用bca（pierce）试剂盒用于蛋白浓度测定。
研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂应在使用前加入缓冲液。
操作方法：
1.在1.5ml离心管中离心收集微生物样品。确保样品体积在20-30ul左右。可以在另一个1.5ml
离心管中加入30ul水比较体积估算。
2.加入1ml水，最高速度离心2分钟清洗样品，弃去上清液。加入50ul buffer a重悬沉淀。
秤取80-90mg蛋白提取粉加入管中（提取粉尽量不要接触管壁，可折叠称量纸倒入）。
3.用配有的研磨棒反复扭转研磨2分钟。再次加入50ul缓冲液a和100ul缓冲液b到同一管
中，继续研磨约30秒(注意：研磨棒可以重复使用，在清洗剂中简单浸泡后，用水冲洗并用纸
巾擦干）。盖上盖子涡旋震荡10秒钟。
4.最高速离心3-4分钟。将上清液转移到新管中（此部分为无表面活性剂的总蛋白）。如果希
望增加蛋白产量，可以重复步骤3-4一次。通常蛋白产量为2-3mg/ml。提取的蛋白可以储存于
-80℃供将来使用。
应用提示：最终的蛋白质产量与步骤3中研磨的频率和时间成正比。研磨时请使用试剂盒中提
供的研磨棒和离心管，以保证最佳效果。
关键词：台式离心机 清洗剂