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单细胞铺板的三种手法

单细胞铺板手法一:均匀单层。要铺成那种很均匀的单层细胞,手法如下:
1,细胞板子先加入一定量(一般是总量培养基的1/5)的培养基,放入孵箱中放置10-20min。
2,在滴入细胞时,细胞板子与通风橱有一定的角度,沿着板壁的孔边缘滴入。
3,滴入后,呈“8”字方法摇晃5-8次。
4,置于水平台上,放置10-20分钟
5,放入孵箱。在细胞铺板时,每一种板子的孔面积有多大,培养的液体量以及加入细胞量。
手法二:中间少,周围多。其实细胞铺板不一定都需要单个单个的那么均匀,比如,做免疫荧光时,学霸姐姐喜欢铺中间少,周围稍多的板子,因为这个样子可以同时检测到单个细胞的形态,另外又可以照一点低倍的用作于统计,所有的细胞都在一个环境中。
要铺这样的细胞样子,那铺细胞时要注意手法了:
1,细胞板子不需要提前用培养基润洗,直接从边上滴入混有细胞的培养基。
2,放置30s-1min后,前后摇晃5-8次。
3,放在水平台上静置2-5min。
4,放入孵箱。
其实在单细胞铺板的时候,你要准确的知道你所养的细胞的特性,比如:
1,细胞的名称,来源。2,细胞的属性。3,细胞分裂时间。
细胞铺板后,细胞状态不好怎么办?
如果出现这种情况,学霸姐姐建议你从以下几个方面考虑一下原因:
1,用来铺板的细胞状态本身就不好。2,用来铺板的细胞传代次数太多,有些老化。3,*消化时间过长。4,中和的血清量及时间不够。5,支原体污染。
细胞铺板是一个经验积累的过程,你的手法也需要积极的改进,不要生搬硬套,也不要一味追求的铺均匀,在实验过程中多思考细胞本身的特征和属性,出现问题积极解决即可。
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