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细胞衰老检测试剂盒(β-半乳糖苷酶法)检测方法

细胞衰老被认为是一种抑制肿瘤的机制和机体衰老的根本原因。衰老代表一种停滞状态,在这种状态下,细胞仍能存活,但不受血清或培养传代的刺激而分裂。
细胞衰老检测试剂盒(β-半乳糖苷酶法)提供一种简单便捷的操作方法,对衰老细胞或组织进行染色检测;本试剂盒适用于培养细胞和组织切片的衰老检测,但仅染色衰老细胞,不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞。
艾美捷biogradetech细胞衰老检测试剂盒(β-半乳糖苷酶法)
中文名称:细胞衰老检测试剂盒(β-半乳糖苷酶法)
英文名字:senescenceβ-galactosidase staining kit
biogradetech货号:d-ake3030-100t
规格:100t
应用:细胞分析
保存建议:请将未开封使用的保存于2-38℃;启用后的试剂盒,请参考说明书保存各个组分。
biogradetech细胞衰老检测试剂盒(β-半乳糖苷酶法)检测方法:
以下方案指-定用于facs实验。如果使用较大的盘子,则相应地增加数量和体积
1.细胞培养:对于悬浮细胞:离心细胞(700 x g,4°c、10分钟)并取出介质。将细胞沉淀重新悬浮在500µl新鲜介质(~106个细胞/ml)中,并将其转移到24孔板中。如果需要,用感兴趣的化合物在37°c/5%co2下处理细胞48小时。对于粘附细胞:将细胞(约5x105个细胞/孔)播种在24孔板中,并孵育过夜。培养后,取出培养基,如果需要,加入含有感兴趣化合物的新鲜培养基,并在37°c/5%co2下处理48小时。对于对照细胞:我们建议单独用载体处理细胞。
2.细胞染色:对于悬浮细胞:处理后,将细胞收集在无菌eppendorf管中,离心(700 x g,4c、10分钟)收集细胞颗粒并除去培养基。在500中重新悬浮细胞颗粒含有1.5µl衰老染料pertube的新鲜培养基。在37°c、5%co2培养箱中培养1-2小时。用500洗涤2xml洗涤缓冲液。在500个细胞中复苏细胞清洗缓冲液并立即使用流式细胞仪进行分析。对于粘附细胞:取出培养基,加入每500含有1.5µl衰老染料的新鲜培养基ml媒体。在37°c、5%二氧化碳条件下培养1-2小时。孵育后,用500洗涤细胞2倍洗涤缓冲液。通过胰蛋白酶消化收集细胞,用500µ洗涤1次,然后将细胞重悬于500冲洗缓冲液,立即用流式细胞仪进行分析。
3.facs:应在fl1通道中测量信号。为了确保只有合适的靶细胞被选通,使用侧散射与fl-1图。我们建议将未染色的对照细胞(即无染料染色)悬浮在洗涤缓冲液中,以建立流式细胞仪。
3t3细胞在24孔中以每孔5x105个细胞铺板,在37°c/5%co2的完-全细胞培养基中处理4小时(分别用和不用200nm柔红霉素;测试和对照反应)48小时。取出培养基,用含有衰老染料的培养基代替,并在37°c/5%co2下孵育2小时。孵育时间后,用washbuffer洗涤细胞2次,将细胞胰蛋白酶化,用wash buffer洗涤一次,并通过facs分析。
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