材料与仪器
lcm 帽子乙醇 糖原 rna 提取试剂盒 超纯水移液器
步骤
一、材料1. 缓冲液、试剂和溶液75% 乙醇 (超纯水配制）糖原，5 mg/ml(ambion，austin，tx)stratagenerna 提取试剂盒（200345，stratagenecloningsystems，lajolla,ca)，包括变性溶液、饱和酚 (存于 4°c)、β-巯基乙醇 (存于 4°c)、氯仿：异戊醇、2mol/l 乙酸钠、异丙醇。或者使用 picopurerna 分离试剂盒（kit0202，arcturus，mountainview,ca)depc 处理的超纯水 (biotecxlaboratories，houston，tx)(4°c 储存）2. 特殊设备移液器无 rna 酶的 1.5 ml 管子3. 细胞和组织来自方案 3 的 lcm 帽子二、方法1. 加入 200ul 变性溶液和 1.6ulβ-巯基乙醇到 0.5 ml 管子中。2. 将 lcm 帽子插入管子，涡旋 5s。3. 倒置管子孵育 5 min。4. 移去 lcm 帽子。这一步获得的样品可以在-80°c 保存 6 个月。5. 将溶液转移到 1.5 ml 管子中。6. 加入 2ul2mol/l 的乙酸钠，温和混匀。7. 加入 220ul 水饱和的酚（底层），温和混匀。8. 加入 60ul 氯仿：异戊醇，剧烈晃动。9. 放于冰上 15 min。10.14000r/min4°c 离心 30 min。11. 吸上层溶液到新管子中。12. 加入 2ul 糖原（最终浓度 10~150ug/ml)。13. 加入 200ul 冷异丙醇。14.-80°c 过夜。
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