一抗的挑选关键和技巧:
(1)单克隆和多克隆抗体的挑选。由一种克隆发生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能方针明确地与单一的特异抗原决定簇结合,就像dao弹地射中方针一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也能够由好几种克隆来发生抗体,构成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。在抗原抗体反响中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易呈现非特异性染色(能够经过关闭等防止)。
(2)使用规模的挑选。有的一抗只能用于westernblotting,或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等;乃至标明白腊切片或冰冻切片。
(3)种属反响性的挑选。这一点很重要,标明这种抗体可能存在种属差异,且这种抗体合适检测哪种种属动物体内的抗原。
(4)种属来历,一般兔来历的多是多克隆;而小鼠来历的多是单克隆,但也有别的。根据此来历来挑选相应的二抗。
(5)生产厂家的挑选。不同厂家的同一种抗体它的实践效价,稳定是不同的。