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全组织琥珀酸脱氢酶活性染色试剂盒说明书

全组织琥珀酸脱氢酶(sdh)活性染色试剂是一种旨在使用合成电子受体四氮唑兰染料,通过反应系统的作用,组织样本中酶活性部位呈现出蓝黑色沉淀现象而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种动物组织样品琥珀酸脱氢酶的活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学。产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,显色清晰。
琥珀酸脱氢酶(succinnate dehydrogenase;sdh;ec 1.3.99.1)是三羧酸循环(tricarboxylic acid cycle;tca)或krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素,位于线粒体内膜,参与细胞呼吸链。琥珀酸脱氢酶由27kd和70kd两个单体组成。其功能在于催化琥珀酸(succinate)的氧化反应,产生延胡索酸(furmarate),通过黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide;fad)传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理,使用人工电子受体染料硝基蓝四氮唑(nitro blue tetrazolium;nbt),接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸(reduced flavin adenine dinucleotide;fadh2)的电子,而被还原,产生不溶性蓝色或蓝黑色甲暨色素。据此证明组织细胞琥珀酸脱氢酶的活性。
保存染色液(reagent b)和反应液(reagent c)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保证6月
染色开始前,将-20℃冰箱里的试剂置于室温下融化;移取2.7毫升染色液(reagent b)到新的15毫升锥形离心管,加入300微升反应液(reagent c),混匀后,标记为染色工作液,置于冰槽里,避免光照。然后进行下列操作。
1.准备1个6孔细胞培养板
2.放进新鲜切除的动物组织样本(注意:建议组织大小为0.5厘米厚,1厘米长;如果过大,最好刀切处理一下)
3.将组织压平
4.小心加入3毫升清理液(reagent a),浸没整个组织
5.小心抽去清理液(reagent a)
6.小心加入3毫升染色工作液,浸没整个组织
7.放进37℃培养箱里孵育10分钟,避免光照
8.小心抽去染色工作液
9.小心加入3毫升清理液(reagent a),浸没整个组织
10.小心移去切片上的清理液(reagent a)
11.重复实验步骤9至10二次
12.小心加入3毫升固着液(reagent d),浸没整个组织
13.室温下孵育15分钟
14.小心抽去固着液(reagent d)
15.小心加入3毫升清理液(reagent a),浸没整个组织
16.小心抽去清理液(reagent a)
17.重复实验步骤15至16二次
18.后续石蜡切片(6微米厚)或冰冻切片(10微米厚)
19.在光学显微镜下观察:表达琥珀酸脱氢酶的组织细胞为阳性组织细胞,呈现蓝黑色。
注意事项
1.本产品为10次操作
2.操作时,须戴手套
3.用户根据实际需求,按比例配制试剂用量
4.反应液(reagent c)避免反复冻融
5.阴性对照时,染色工作液不含有反应液(reagent c)
6.可以使用50毫摩尔丙二酸钠(sodium malonate)作为抑制剂
7.整个操作,在避光状态下进行
8.染色孵育时间,根据样品和酶活性强弱调整,通常为5至30分钟
9.全组织染色存在其染色不均匀、组织内部染色渗透困难等局限
10.样品染色后保存,避免光照
11.本公司提供系列组织细胞酶活性染色试剂产品
质量标准
1.本产品经鉴定性能稳定
2.本产品经鉴定显色清晰
关键词:培养箱 光学显微镜
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