实验室小贴士
用在免疫印迹中zui常规的膜的类型是硝酸纤维素膜（nc 膜）和聚偏氟乙烯（pvdf）膜。两者主要区别：
产品 biotrace nt 膜 fluorotrans w pvdf 膜
*货号 66485 bsp0161
描述 纯硝酸纤维素，0.22μm 聚偏氟乙烯，0.2μm
应用 蛋白转移
核酸检测
elisa 蛋白转移
蛋白点或条印迹
免疫染色检测
优势 高灵敏度
低背景 zui高的灵敏度
低背景
低 burn through
高结合力
化学品抗性
高拉伸强度
结合反应 疏水和静电 疏水（甲醇浸泡）
固定方法 western 转移点或条印迹
烤和紫外交联（用于核酸） western 转移点或条印迹
转印膜的免疫印迹常见问题分析与解决方案
问题 可能原因 解决方案
没有阳性条带或很弱 抗体活性低或效价低 分装和在零下 20 度储存抗体溶液以及避免多次反复冻融。使用更高浓度的一抗。
转膜不充分（转膜后通过凝胶染色得到了确认） 增加转膜的时间。降低转膜缓冲液中甲醇的浓度。
加入 0.1%的 sds 能够帮助大蛋白的转膜。
低的偶联活性 确保胶和膜之间没有气泡。使用不含 sds 的转膜缓冲液。如果使用的是 biotrace nt 膜，则需在转膜缓冲液中加入甲醇
封闭剂干扰了抗体的结合 在 4 度储存偶联物。增加偶联物的浓度或孵育时间。
背景高 使用一个不同的封闭剂。
抗体和酶偶联的效果差 颜色反应时间太长 当需要的颜色深度达到之后立即停止反应
封闭不* 使用亲和纯化的二抗。
封闭剂中存在磷酸酶或过氧化物酶的活性 增加封闭时间。使用一个不同的封闭剂。
背景点状物 缓冲液中存在颗粒 试剂使用前用过滤器过滤。
假阳性或点状 一抗的交叉反应 进一步纯化或预吸附膜抗体。如果条件可以的话使用单抗。降低一抗的浓度。
样本中存在磷酸酶或过氧化物酶的活性（通过在检测中不加一抗和二抗得到确认） 在封闭前通过 80 度 20 分钟加热来失活酶的活性。
wb产品线信息
货号 名称 规格
sa7937 ripa裂解液(强) 100ml
37623 qproteome ffpe tissue kit从福尔马林固定、石蜡包埋组织中高效抽提全长蛋白 1kit
pa001 bca蛋白定量试剂盒 250次/500次/1000次
pa002 bradford蛋白定量试剂盒 250次/1000次
pa003 lowry蛋白定量试剂盒 250次/1000次
180-8210d lds sample buffer,with reducing(4×) 10ml/瓶
180-6003 预染蛋白marker 200ul/支
180-8001h sds梯度预制胶 4-20% 8x10cm 12 well 10片/盒
180-8002 sds预制胶电泳缓冲液 running buffer（20x） 500ml/瓶
180-1000/1/2 ve-180 垂直电泳槽(0.75mm/1.0mm/1.5mm) 套
180-**** ve180垂直电泳槽其他配件 ea
180-7001 快速蛋白染液 fast protein stain 1l
bsp0161 pvdf膜[0.2μm pvdf膜] (pall) 26cmx3.3m
66485 硝酸纤维素膜[0.22μm] (pall) 30cmx3m
8006-6006 快速转膜缓冲液（10 x） fast transfer buffer stock solution 500ml
186-1000 ve-186 转移电泳槽（标配） 套
586-1000 ve-586 转移电泳槽（四块胶，模具成型，含蓝冰冰盒）（标配） 套
386-1000 ve-386 半干转移电泳槽（标配） 台
sa7592 丽春红s染色液(10×ponceau s) 50ml/10ml
sa7588 western封闭液 100ml
sa7589 western封闭液(奶粉) 100ml
sa7586 western blot一抗稀释液 l
sa7587 western blot二抗稀释液r l
21338 β-actin antibody 100ul
21800 β-actin mouse monoclonal antibody 100ul
21612 gapdh antibody 100ul
44032 β-tubulin monoclonal antibody(5g3) 100ul
l3032 goat anti-mouse igg secondary antibody, hrp conjugated 1ml
l3012 goat anti-rabbit igg secondary antibody ,hrp conjugated 1ml
l3042 rabbit anti-goat igg secondary antibody,hrp conjugated 1ml
180-501 超灵敏 ecl发光液 50ml+50ml
180-5001 超灵敏 ecl发光液 250ml+250ml
010-q 1-200µl电泳点样吸头，无色透明，袋装 1000/袋，10袋/箱
yw-st-lw 一次性乳胶手套，加厚型，l/m/s/xs 100只/盒，10盒/箱
yw-st-tnb 一次性丁腈手套，耐用型，l/m/s/xs 100只/盒，10盒/箱
yw-st-gnb 一次性丁腈手套，透气型，l/m/s/xs 100只/盒，10盒/箱