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简单介绍质粒DNA提取实验操作步骤

1.细菌繁殖:lb培养基,2ml / 20ml,37℃,200rpm,摇动过夜;
2.离心10分钟,转速为5000 rpm,4°c;丢弃液体;
3.用预冷的tes缓冲液洗涤沉淀物(细胞),在4°c下以10 rpm,5 000 rpm离心10分钟,加入预冷的1 ml溶液i,并冰浴10分钟;
4.重悬,加入150ul溶菌酶母液,在室温下静置5分钟;
5.添加1.2ml的溶液ii并在冰浴上保持5分钟;
6.加入0.9 ml预冷的乙酸钾,混合均匀,在4°c下以12 000 rpm离心10分钟;
7.加入1.5 ml异丙醇,并将其放在-20°c的冰箱中放置15分钟;
8.在4°c下以12 000 rpm离心10分钟;
9.取沉淀并将其悬浮在400 ul te缓冲液中;
10.添加40ul 3m naac;
11.phenol/trichloromethane,萃取,乙醇沉淀;
12.在4°c下以12 000 rpm离心10分钟;
13.取出沉淀物,将其冷冻干燥,然后重悬于50ul te缓冲液中;
14.电泳检测提取的dna的质量。
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