对照实验结果好，却没有回收到目的片段，实验出了什么问题？
参考见解：
1 连接用室温保温1小时，能满足大多数克隆，为提高效率，需4oc过夜。
2 插入片段带有污染，使3`-t缺失，或抑制连接，抑制转化。为此，将插入片段和pgem-t正对照混合，再连接。如降低了对照的菌落数，插入片段需纯化，或重新制备。如产生大量的蓝斑，插入片段污染有核酸酶，使pgem-t或pgem-t easy载体3`-t缺失。
3 插入片段不适于连接。用凝胶纯化的插入片段，因受uv过度照射，时有发生。uv过度照射会产生嘧啶二聚体，不利于连接，dna必需重新纯化。
4 带有修复功能的耐热dna聚合酶的扩增产物末端无a，后者是pgem-t或pgem-t easy载体克隆所需。加taq dna聚合酶和核苷酸可在末端加a。详情查pgem-t pgem-t easy载体技术资料（tm042）。
5高度重复序列可能会不稳定，在扩增中产生缺失和重排，如发现插入片段高频率地产生缺失和重排，需用重组缺陷大肠杆菌菌株，如sure细胞。