标准菌株验证鉴定步骤！
一、菌种活化：包括干粉标准菌株、标准贮备菌株及工作菌株；
⒈*、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌标准菌株：挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中，划线接种于营养琼脂平板上，36℃±1℃培养18-24小时。并观察菌落形态。
a.*：菌落凸起，圆形，不透明；
b.大肠埃希氏菌：菌落稍凸，圆形，湿润，乳白色；
c.铜绿假单胞菌：菌落扁平，圆形，边缘不整齐，光滑湿润，可产生蓝绿或黄绿色素；
d. 枯草芽孢杆菌: 表面粗糙不透明，镜检菌体有芽孢。
⒉白色念珠菌：挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中，划线接种于改良马丁琼脂培养基平板或pda琼脂平板上，30℃-35℃培养24-48小时。本菌细胞呈卵圆形，很象酵母菌，比葡萄球菌大5～6倍，革兰氏染色阳性，但着色不均匀。
黑曲霉：挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中，划线接种于改良马丁琼脂斜面培养基上，23℃-28℃培养48-96小时。菌丛呈黑褐色，粗糙。
⒊生孢梭菌：挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中，接种于硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃～35℃培养 18-24小时；或在厌氧条件下接种于哥伦比亚琼脂上，30℃～35℃厌氧培养 18-24小时。
二、菌种鉴定：
⒈*：
革兰氏染色试验：革兰氏阳性菌(紫色)，葡萄状排列，球菌。
兔血浆试验：接种1个单菌落于1支兔血浆溶液中，30℃-35℃培养至6小时，每半小时观察一次。凝固为阳性。*为阳性反应。
⒉大肠埃希氏菌：
革兰氏染色试验：革兰氏阴性杆菌，红色。
imvc生化试验：
⒊铜绿假单胞菌：
革兰氏染色试验：革兰氏阴性杆菌，红色。
氧化酶试验：将氧化酶试纸用蒸馏水浸湿，用细玻璃棒或一次性接种针挑取单个菌落，涂在试纸上。在60s内变为蓝色或蓝紫色为阳性，不变色为阴性。
绿脓菌素试验：取斜面培养物接种于 pdp 琼脂培养基斜面上，培养 24 小时，加三氯甲烷 3～5ml 至培养管中，搅碎培养基并充分振摇。静置片刻，将三氯甲烷相移至另一试管中，加入 1mol/l 盐酸试液约 1ml，振摇后，静置片刻，观察。若盐酸溶液呈粉红色，为绿脓菌素试验阳性，否则为阴性。本菌为绿脓菌素试验阳性。
荧光试验：接种于金氏b培养基(或假单胞菌产荧光色素培养基)上，36℃±1℃培养18-24小时，在366nm紫色灯下有蓝绿色荧光。
⒋枯草芽孢杆菌：
菌落形态：表面粗糙不透明，有皱摺。
镜检：用芽孢染色液染色，菌体有芽孢。
⒌白色念珠菌：
革兰氏染色试验：呈卵圆形，很象酵母菌，比葡萄球菌大5～6倍，革兰氏染色阳性，但着色不均匀。
念球菌显色培养基：30-35℃培养24-48小时，呈绿色菌落。
产芽管试验：挑取1%吐温80-玉米琼脂培养基上的培养物，接种于加有一滴血清的载玻片上，盖上盖玻片，置湿润的平皿内，置 35～37℃、1～3 小时，置显微镜下观察，可见到由孢子长出短小芽管。
⒍黑曲霉：
23℃-28℃培养48-96小时。菌丛呈黑褐色，粗糙，有黑色孢子产生。
⒎生孢梭菌：
革兰氏染色试验：革兰阳性梭菌，有或无卵圆形或球形的芽孢。
哥伦比亚琼脂培养基试验：接种于含*的哥伦比亚琼脂培养基平板上，置厌氧条件下培养 48～72 小时，应生长。
过氧化氢酶试验：滴加 3%过氧化氢试液，若菌落表面有气泡产生，为过氧化氢酶试验阳性，否则为阴性。本菌为阴性反应。
三、需购买试剂：
菌株培养基及试剂
*hb8278革兰氏染色液试剂盒、hb4117 兔血浆、hb0109-7营养琼脂培养基
大肠埃希氏菌hbig13 hbi大肠杆菌生化鉴定条、hb8280甲基红试剂盒、hb8281 v-p试剂盒、hb8279 kovacs氏靛基质试剂盒
铜绿假单胞菌hb5187绿脓菌素测定培养基(pdp）、hb2100氧化酶试纸、hb8484假单胞菌产荧光色素培养基
枯草芽孢杆菌hb8300芽孢染色液
白色念珠菌hb7015念球菌显色培养基、hb0236-1 1%吐温80-玉米琼脂培养基
黑曲霉hb4701改良马丁琼脂培养基
生孢梭菌hb0124-1哥伦比亚琼脂培养基、hb0124-1a硫酸*(4mg/支)、hb8650 3%过氧化氢试液
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