htert成纤维细胞为永生化子宫内膜成纤维细胞 (t hesc) 具有延长的寿命，并且在核型、形态和表型方面与原代亲代细胞相似。在功能上，t hescs 显示激素治疗后蜕膜化的生化终点。
thescs来源于从患有肌瘤的成年女性身上获得的基质细胞。原代基质子宫内膜细胞通过用来自包装细胞系pa317-htert的上清液感染而永生化，该细胞系表达htert和嘌呤霉素抗性基因。
htert成纤维细胞培养方案如下：
一、所需材料
dulbecco改良eagle培养基(dmem)/f12 (sigma, d2906)
碳酸氢钠
its+ universal culture supplement premix (bd, 354352)
嘌呤霉素
木炭/葡聚糖处理的胎牛血清（hyclone，sh30068.03）
胰蛋白酶-edta溶液（hbss中的0.25%胰蛋白酶/0.53 mm edta）
细胞培养测试的dmso
实验耗材：t75细胞培养瓶、t25细胞培养瓶、nest锥形瓶、移液枪吸头等
实验室仪器：-80冰箱、知楚二氧化碳振荡摇床、恒温水浴锅、瑞宁移液器、液氮罐、倒置显微镜等
二、培养基的制备
这些细胞系的基础培养基是dmem/f12，辅以：
1.5克/升碳酸氢钠
1% its+ universal culture supplement premix
500纳克/毫升嘌呤霉素
10%木炭/葡聚糖处理的胎牛血清
三、冷冻细胞的处理程序和培养的启动
为确保高活力，解冻小瓶并在收到后尽快开始培养。如果到达后需要储存冷冻培养物，请将小瓶储存在液氮蒸气中，而不是-70°c。在-70°c下储存会导致活性丧失。
有关从每批atcc子宫内膜成纤维细胞中回收的活细胞总数，请参阅产品信息表最后一页上提供的批次特定信息。
准备一个含有推荐的培养基的25 cm²或75 cm²培养瓶。在添加小瓶内容物之前，应将含有生长培养基的容器置于培养箱中至少15分钟，以使培养基达到其正常ph值（7.0至7.6），并避免在恢复过程中培养基碱度过高的细胞。
在37°c水浴中轻轻搅拌解冻小瓶。为减少污染的可能性，请将o形圈和盖子远离水。解冻应该很快（大约2分钟）。
1.细胞解冻后，请尽快从水浴锅中取出，并使用70%乙醇溶液来进行净化。操作过程需要在无菌环境中进行，避免污染。
2.将小瓶内容物转移到含有6.0至8.0 ml培养基的离心管中，并以大约125 xg的速度将细胞悬浮液离心5至7分钟。
3.丢弃上清液并将细胞重新悬浮在新鲜的生长培养基中（有关推荐的稀释比，请参阅特定于批次的信息）。将此悬浮液添加到准备好的培养容器中。
4.在37°c、5% co2加湿培养箱中孵育培养物。
四、继代培养程序
使用nest的t75锥形瓶进行培养的体积。增加或减少其他尺寸的培养容器所需的解离介质的量。
htert成纤维细胞传代培养注意事项：
为避免结块，在等待细胞分离时不要敲打或摇动烧瓶。难以分离的细胞可置于37°c以促进分散。细胞培养过程中需要每2到3天更新一次培养基。
1.有关细胞传代培养的浓度，请参阅产品信息表。当确定细胞已准备好进行传代培养时，继续下一步。
2.取出并丢弃介质。
3.向烧瓶中加入2.0至3.0 ml trypsin-edta溶液，在倒置显微镜下观察细胞，直至细胞层分散（通常在5至15分钟内）。
4.添加6.0至8.0 ml的生长培养基，并通过轻轻移液吸出细胞。
5.将细胞悬浮液转移到15 ml离心管中，并以大约125 xg的速度旋转5至10分钟。
6.丢弃上清液并在新鲜生长培养基中重悬细胞。将适当的细胞悬浮液等分试样添加到新的细胞摇瓶中。
7.有关推荐的接种浓度，请参阅产品表。
五、细胞冻存
在以下培养基中冷冻细胞：95%生长培养基，5% dmso。将小瓶储存在液氮蒸气中。避免将小瓶浸入液氮中。
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