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【转染小课堂】带你了解转染的奥妙和神奇!

转染(transfection):是真核细胞主动或被动导入外源dna片段而获得新的表型的过程。
原理:将dna导入细胞使得它可利用细胞自身的细胞机制表达和合成蛋白质,将rna导入细胞则是用来通过终止翻译来降低某特定蛋白的合成。
转染的rna在细胞质中发挥作用,dna则需被转运到细胞核中从而达到有效的转染。在核内,dna会被短暂表达或整合到基因组dna而将该遗传改变传代到下一代细胞。
转染类型:
瞬时转染:外源dna/rna不整合到宿主染色体中,因此,一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其他调控元件的分析,在转染后24-96h内分析结果。一般来说,超螺旋质粒dna转染效率较高,在转染后24-72小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。
稳定转染:外源dna既可以整合到宿主染色体中,也可以作为一种游离体整合到宿主细胞中。外源dna整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转移酶(aph;新霉素抗性基因),潮霉素b磷酸转移酶(hph),胸苷激酶(tk)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。
转染方式:
正向转染:细胞培养板中先加入细胞然后再加入转染复合物的方法。例如:deae-葡聚糖法、磷酸钙法、脂质体介导法、非脂质体的脂质活化的树枝状分子介导法、病毒介导法等。
反向转染:核酸和转染试剂复合物先加入到孔板中,然后再向小孔中加入细胞。例如:显微注射、电穿孔、基因枪等。
化学方法:使用载体分子中和或使带负电荷的核酸带正电荷,包括deae-葡聚糖法、磷酸钙法、非脂质体脂质分子介导法、阳离子脂质体转染、通过其他阳离子聚合物(如聚乙烯,pei,活化的树枝状分子介导法)。
生物方法:依靠病毒包装将非病毒基因转移到细胞中的方法(也称为转导),包括病毒介导法。
物理方法:将核酸直接递送到细胞质或细胞核中,包括显微注射、电穿孔、基因枪。
转染影响因素:
核酸类型:质粒dna,mrna,sirna,mirna的mimic和inhibitors...
细胞密度:一般来说,当细胞密度达到60%~80%时进行转染可以取得较高的转染效率,过低或过高都会影响转染效果。
细胞类型:如原代细胞、贴壁细胞、悬浮细胞、神经细胞、肿瘤细胞、昆虫细胞等。
细胞系的健康程度和存活力
转染试剂类型:脂质体、非脂质体的脂质和活化的树枝状分子。
北京百奥创新科技有限公司提供多种形式和规格的转染试剂,供您选择:
一、pei转染试剂
品牌 产品货号 产品名称 规格
serochem
prime-p100-100mg
prime-p100-1g
pei prime™️ 粉末,转染级线性聚乙烯亚胺 100mg/1g
prime-aq100-5mlprime-aq100-100ml pei prime™️ aq 1 mg/ml 液体转染试剂 5ml/100ml
polysciences 24765-124765-100 pei max® - transfection grade linear polyethylenimine hydrochloride (mw 40,000) 100mg/1g
23966-123966-100 polyethylenimine, linear, mw 25000, transfection grade (pei 25k™) 100mg/1g
polyplus 114-15 jetprime transfection reagent 0.1 ml
二、脂质体转染试剂
品牌 产品货号 产品名称 规格
polyplus 101000122 in vivo-jetrna®+ transfection reagent 1 ml
thermofisher 11668019 lipofectamine™ 2000 transfection reagent 1.5 ml
l3000015 lipofectamine™ 3000 transfection reagent 1.5 ml
三、rnai转染试剂
品牌 产品货号 产品名称 规格
多纳 dn001- 01 calnp™ rnai in vitro b液0.1 ml;a液 0.5 ml
dn001- 05 b液0.5 ml;a液 1 ml x 2
dn001- 10 b液1.0 ml;a液 1 ml x 4
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