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液相色谱仪可测定中药材中的黄曲霉毒素

黄曲霉毒素是主要由黄曲霉寄生曲霉产生的次生代谢产物,在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率zui高。这种毒素通常们存在于土壤、动植物、各种坚果中,特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品,是霉菌毒素中毒性zui大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。
它是一种毒性很强的肝毒素,可引起肝脏的急慢性损害,同时还对肾脏等其他多种组织器官造成严重损害,并具有致癌、致畸、致细胞突变的作用。除了广泛存在于粮油、坚果等产品当中,近年来多次报道指出,我国中草药上黄曲霉毒素污染也很严重。对此,可以使用液相色谱仪进行黄曲霉毒素的检测。
一、液相色谱仪检测黄曲霉毒素实验材料:
免疫亲和柱:黄曲霉毒素总量免疫亲和柱
色谱柱:venusil mp c18 (4.6*150mm, 5μm),
二、液相色谱仪检测黄曲霉毒素实验方法:
1、混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合标准品(黄曲霉毒素b1、b2、g1、g2标示浓度分别为1. 0µg/ml、0.3µg/ml、1.0µg/ml、0.3µg/ml)1ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为储备液。精密量取储备液1ml,置50ml量瓶中,用70%甲醇溶液稀释至刻度,即得。
2、供试品溶液的制备 取供试品粉末约10g,精密称定,加入氯化钠2g,精密加入70%甲醇溶液100ml,超声处理20分钟,离心5分钟(离心速度8000转/分),精密量 取上清液10ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,精密量取25ml,通过免疫亲和柱,流速每分钟2-3ml,用水5ml淋洗,洗液弃去,使空 气进入柱子,再用甲醇1.4ml分2次洗脱,收集洗脱液,用水定容至2ml,即得。
3、测定法 分别精密吸取上述混合对照品溶液20µl、供试品溶液20µl,注入液相色谱仪,测定峰面积,从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素b1、b2、g1、g2的量,计算,即得。
三、黄曲霉毒素含量检测的标准
联合国有关组织(who, fao, unep等)于20世纪90年代制订了黄曲霉毒素在食品中的控制标准。1995年who规定zui高*为15.g.kg-1,婴儿食品中不得检出。欧盟国家规定人类生活消费品中的含量不超过2.g.kg-1,总量(指bl+b2+g1+g2)不超过4.g.kg-1 。韩国食品医药品安全厅( kfda) 发布了有关中药材中黄曲霉毒素b1*和试验方法的公告,要求甘草、决明子、桃仁等9味中药材黄曲霉毒素b1低于10.g.kg-1。
目前, 我国卫生部已经制定了部分食品黄曲霉毒素含量限度的暂行标准,但尚没有中药材、中药饮片以及中成药黄曲霉毒素含量*的国家标准。从报道的中药材及中药制剂中黄曲霉毒素的污染水平来看,很多种类大大超过了食品的*。我国无论从保障中药及其相关产品的安全性,及出口中药材的管理方面,均需要对黄曲霉毒素污染问题给与充分重视。
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