人成纤维生长因子-21(fgf-21)elisa试剂盒
(用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)
一、原理：
本实验采用双抗体夹心abc-elisa法。用抗人fgf-21单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的fgf-21与单抗结合，加入*化的抗人fgf-21，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的streptavidin与*结合，加入底物工作液显蓝色，后加终止液硫酸，在450nm处测od值，fgf-21浓度与od值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中fgf-21浓度。
二、试剂盒组成（2-8℃保存）
酶标板（coated wells）
96孔
酶标抗体工作液（enzyme conjugate）
12ml
10×标本稀释液（sample buffer）
12ml
20×浓缩洗涤液（wash buffer）
50ml
标准品（standards）：20ng/ml
1瓶
底物工作液（tmb solution）
12ml
抗体工作液（biotinylated antibody）
6ml
终止液（stop solution）
12ml
三、准备试剂与收集血样：
10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。收集标本：血清、血浆（edta、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。标准品液配制：取8个1.5ml离心管，管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。 4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）
四、检测程序：
加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃40分钟。洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。每孔加入蒸馏水和抗体工作液各50ul(空白除外)。将反应板充分混匀后置37℃20分钟。洗板：同前。每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃10分钟。洗板：同前。每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。每孔加入100ul终止液混匀。30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。五、结果计算与判断：
1.所有od值建议减除空白值后再行计算。如空白od低于0.1，也可以直接计算。
2.以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 pg/ml为横坐标，od值为纵坐标，使用软件作图，画出标准曲线。
3.根据样品od值计算出相应fgf-21含量。软件可以向本公司邮件索取。
六、试剂盒性能：
1.灵敏度：小的fgf-21 检测浓度小于15pg/ml。
2.特异性：可同时检测重组或天然的人fgf-21。不与人其它细胞因子有交叉反应。
3.重复性：板内、板见变异系数均小于10％。
七、注意事项：
1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。
2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致度误差及od值错误地升高。
3. 检测时所有试剂都要恢复到室温。板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。
4. 试剂盒使用超敏tmb溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。
5. 说明书中试剂盒组成为96t的量，48t的量应减半！
6. 本试剂盒宜置4oc冰箱保存。仅用于科研，不能用于临床诊断！