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ATCC细胞操作采集及保存方法

atcc细胞采集及保存:
1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:可用edta或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° c 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
atcc细胞操作方法
(1)取成年新西兰大白兔,耳缘静脉注射空气处死后,取下兔子的双腿,立即用75%乙醇浸泡。
(2)移入细胞房内,去除双腿表面的皮毛及肌肉,剪取关节段,移至超菌工作台内。
(3)pbs洗涤数次,用手术刀或弯剪将关节表面的软骨组织取下。
(4)软骨组织块静置5min,弃去上层液体及悬浮组织,将软骨组织剪成1mm3的大小。移到离心管中加3倍体积的0.25%胰蛋白酶,置入37℃的恒温摇床中,振荡消化15-20min;
(5) 4℃静置5min;弃上清,pbs洗涤,去上清。加入0.2%胶原酶ii,置入37℃的恒温摇床中,振荡消化2h;
(6)加入生长培养基终止消化,反复吹打后依次通过200目滤网。收集滤液,1200rpm离心8min,弃上清,用dmem*培养基重新悬浮细胞, 放入37℃,5%co2细胞培养箱中培养;
(7)细胞传代后放入预置有薄骨片或盖玻片的培养板中进行培养。细胞*展开后即可固定做原代鉴定。
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