q1: 什么是内毒素？
a1:内毒素是一种复杂的脂多糖（lps），存在于大多数致病性革兰氏阴性细菌的外膜上。虽然煮沸 30 分钟不会破坏内毒素的稳定性，但某些强氧化剂（如超氧化物、过氧化物和次氯酸盐）可以降解内毒素。
q2: 可接受的最大内毒素剂量是多少？a2:1 eu 大约相当于 100 pg 的大肠杆菌脂多糖--大约 105 个细菌中的含量。人类只要接触到5 eu/1kg 的内毒素，就会出现症状。这些症状包括但不限于发烧、低血压、心率加快和尿量少。即使血液中含有小剂量的内毒素，也往往是致命的。fda对在美国销售的药品规定了以下最高允许内毒素含量：1.药物（可注射，鞘内注射）- 0.2 eu/1kg体重2.药物（可注射，非鞘内注射）--5 eu/1kg体重3.无菌水 - 0.25-0.5 eu/ml（取决于预期用途）q3: 我应该选择哪种内毒素检测方法？
a3:在决定使用哪种内毒素检测试剂盒之前，您需要考虑几个问题。首先，您要检测多少样本，检测频率如何？如果您只检测一两个样品，而且只检测一次，那么您可以考虑内毒素检测服务机构。如果您计划定期检测，那么您首先需要评估您目前拥有的设备。如果您有多种可用设备，请考虑您希望获得的结果类型。如果您必须获得定量结果，那么凝胶法试剂盒将无法满足您的需求，因为凝胶法检测只能得出定性的结果。检测灵敏度是另一个重要的考虑因素。kinetic-qcl™ 动态显色 lal 检测法和 pyrogene™ 重组因子 c 检测法的灵敏度都可低至 0.005 eu/ml。pyrogent™-5000动态浊度lal测定的读数可达0.01 eu/ml。pyrogent™凝胶法检测试剂盒可订购不同灵敏度的产品： 0.03、0.06、0.125 和 0.25 eu/ml。如果您需要经常检测许多样品，那么您可能需要考虑购买尚未拥有的设备和软件。与pyrogent™凝胶法相比，光度法和重组c因子法所需的上手操作时间更短，灵敏度更高。
q4:进行lonza 细菌内毒素检测 (bet)、lal 或 pyrogene™ 重组因子 c (rfc) 内毒素检测需要哪些设备？
a4:不同的内毒素检测方法需要使用的设备可能也不同。如果使用pyrogent™ 凝胶法检测，需要一个非循环水浴锅或一个能在 37°c 下加热的干热块。如果kinetic-qcl™ 或 pyrogent™-5000检测，则需要吸光度酶标仪和内毒素检测分析软件，该酶标仪应具有振荡功能，能在 37°c 下孵育整个检测过程，并能在 405 nm（用于 kinetic-qcl）或 340 nm（用于 pyrogent™-5000）波长下读取动力学数据。如果使用pyrogene™ rfc 检测，则需要使用配有 380/440 nm滤光片的孵育荧光酶标仪。我们的所有试剂盒都需要使用漩涡混合器和标准实验室移液器。
q5:在进行lonza 细菌内毒素检测 (bet)、lal 或 pyrogene™ 重组因子 c (rfc) 内毒素检测试验时，为什么要使用玻璃配件而不是塑料？
a5:内毒素在塑料表面的附着力比玻璃表面强。因此，我们建议在配制内毒素对照标准（cse）稀释液时使用硼硅酸盐玻璃稀释管。在某些情况下，某些塑料可能被证明是可以接受的样品容器。虽然玻璃仍是样品容器材料，但聚苯乙烯可能是第二选择，聚丙烯则是第三选择。一些客户也表示使用 pet 材料效果不错。如果您计划在检测前将样品保存一段时间，则应验证样品是否能在您计划使用的容器中保存，并确认样品中的任何内毒素在保存后都能被回收。
q6:在使用lonza 细菌内毒素检测试剂盒 (bet)、lal 或 pyrogene™ 重组因子 c (rfc) 进行内毒素检测时，为什么要对标准内毒素 (cse) 对照稀释液进行涡旋处理？
a6:内毒素会附着在玻璃表面，可以通过适当的涡旋来复溶，以确保等分到反应管或微孔板中的溶液浓度正确。在稀释之前，应将cse小瓶涡旋15 分钟。每次使用小瓶时都应重复此操作，而不仅仅是在复溶后。每次使用 cse 稀释液前应至少涡旋 1 分钟。使用前最好立即将 cse 稀释液涡旋几秒钟。
q7: 进行lonza 细菌内毒素检测 (bet)、lal 或 pyrogene™ 重组因子 c (rfc) 内毒素检测时，如何将 eu/ml（内毒素单位）转换为 ng/ml？
a7:根据内毒素来源的不同，从eu/ml到纳克的换算也会有所不同。fda最初将内毒素单位(eu)定义为参考内毒素标准ec-2中0.2 ng或5 eu/ng的内毒素活性。将现行fda rse, ec-6从eu转换为ng，转换量为10 eu/ng。以前版本的bet<85>usp中规定，合适的cse效价在2至50 eu/ng之间。
q8:在进行lonza 细菌内毒素检测 (bet)、lal 或 pyrogene™ 重组因子 c (rfc) 内毒素检测试验时，是否应该使用匹配的试剂、cse？
a8:您需要使用匹配的试剂，以符合 fda 对内毒素检测的要求。龙沙的每批 lal 都使用标准 ec-6 进行功能测试。然后，通过与参考标准内毒素（rse）平行测试，将该批次 lal 与我们的对照标准内毒素（cse）进行 匹配。这种 rse/cse 相关性检测可确定该批次 cse 与该批次 lal 一起使用时的效力。rse/cse 相关性测定的程序摘自美国食品及药物管理局（fda）关于将嗜酸性卵母细胞裂解物检测法确认为人和动物肠外药品、生物制品和医疗器械最终产品内毒素检测法的指导原则。fda 指出，使用 lal 生产商出具的质量证书，企业就无需自行进行 rse/cse 比对。龙沙提供的试剂盒包含适用于我们所有检测类型的匹配试剂，使您的内毒素检测更简单。
q9:准备运行lonza 细菌内毒素检测试剂盒 (bet)、lal 或 pyrogene™ 重组因子 c (rfc) 时，如何确定 cse 的效力？
a9:龙沙确定 cse 效力的 rse/cse操作见每种匹配试剂盒的coa。一般来说，将多瓶 cse 的内毒素稀释液与用 rse 生产的一系列标准品进行未知物测试。将 cse 稀释液的结果与 rse 的结果进行比较计算，得出以 eu/ml 为单位的效力。对于凝胶法，终点的稀释倍数的几何平均数乘以灵敏度，即可确定以 eu/ml 为单位的效价。对于定量方法，对结果在所测 rse 标准曲线范围内的稀释液进行平均，以确定以 eu/ml 为单位的效价。要计算每纳克的效价，效价要乘以复溶cse 所用的体积（例如 5 ml）和每个小瓶中冻干的相应ng内毒素。得出 eu/ng。
q10:在进行lonza 细菌内毒素检测 (bet)、lal 或 pyrogene™ 重组因子 c (rfc) 内毒素检测试验时，应该如何处理 lal 试剂？
a10:lal 试剂应轻拿轻放。复溶后，轻轻倒置或旋转试剂瓶，试剂瓶中的内容物很容易溶解。涡旋或剧烈摇晃重组的 lal 试剂会使其起泡，不利于内毒素检测。