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ATCC细胞分离液快速操作说明和使用及保存

atcc细胞分离液快速操作说明和使用及保存中的注意事项:
注意:1,分离液和所分离样本一定在20℃水浴箱中复温20 分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃±2℃时分离效果。
2,使用无静电反应的离心管,推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
3,所有操作过程一定要在无菌条件下进行。
4,*抗凝剂选择:edta、枸橼酸、肝素。应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂
体积。
a. 小量分离-使用1-2ml新鲜抗凝血,骨髓,脐带血:
1,取新鲜抗凝血1-2ml,与全血及组织匀浆稀释液(cat#:2010c1119)1:1 混匀;
2,小心加于与混合液等体积的细胞分离液之液面上;
3,以400g(约1500 转/分)离心15 分钟(半径15cm 水平转子);
此时离心管中由上至下细胞分为四层。*层;为血浆层。第二层;为环状乳白色淋巴细胞层。第三层;为透明分离液层。第四层;为红细胞层。收集第二层细胞放入含4-5ml 细胞洗涤液(cat#:2010x1118)的试管中,充分混匀后,以1800 转/分离心20 分钟,弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2 次即得所需细胞。
b. 中量分离-使用5-10ml新鲜抗凝血,骨髓,脐带血:
1,取新鲜抗凝血5-10ml,与全血及组织匀浆稀释液(cat#:2010c1119)1:1 混匀;
2,将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上;(混合液:分离液=2:1)
3,以500g(约1800 转/分)离心15 分钟(半径15cm 水平转子);
此时离心管中由上至下细胞分为四层。*层;为血浆层。第二层;为环状乳白色淋巴细胞层。第三层;为透明分离液层。第四层;为红细胞层。收集第二层细胞放入含10ml 细胞洗涤液(cat#:2010x1118)的试管中,充分混匀后,以1800 转/分离心20 分钟,弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复洗涤2 次即得所需细胞。
c. 大量分离i-使用20ml新鲜抗凝血,骨髓,脐带血:
1, 取新鲜抗凝血20ml 以200g(约1100 转/分)离心20 分钟弃去血浆;
2,向弃去血浆的血细胞中加入全血及组织匀浆稀释液(cat#:2010c1119)12ml 小心混匀;
3,将混合液小心叠加于细胞分离液之液面上;(混合液:分离液=2:1)
4,以600g(约2000 转/分)离心15 分钟(半径15cm 水平转子);此时离心管中由上至下细胞分为四层。*层;为血浆层。第二层;为环状乳白色淋巴细胞
层。第三层;为透明分离液层。第四层;为红细胞层。收集第二层细胞放入含20ml 细胞洗涤液(cat#:2010x1118)的试管中,充分混匀后,以1800 转/分离心20 分钟,弃去上清留沉淀atcc细胞重新悬起。重复洗涤2次即得所需细胞。
人正常前列腺上皮细胞;rwpe-1
人羊膜细胞;wish
人胚肺成纤维细胞;mrc-5
人胚胎肺成纤维细胞;wi-38
人胚肾细胞;293 [hek-293]
人淋巴细胞;1301
人胚肺二倍体细胞;kmb-17
人胚肺成纤维细胞;wi-38 [wi38]
人脐静脉内皮细胞(人膀胱癌细胞污染);ecv-304 [ecv304;ecv 304]
人胚肺成纤维细胞;mrc-5
人羊膜细胞;wish
人二倍体细胞;hel
atcc细胞
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