rubicon公司拥有thruplex®和picoplex®技术。特殊的引物或接头设计，能以微量dna样本起始构建下一代测序文库。
thruplex用于cfdna-液体活检样品
液体活检样品包括
循环核酸
– cell-free dna (cfdna)
循环肿瘤dna（ctdna）占一小部分
– cell-free mrna
– cell-free mirnas, long non-coding rna
循环肿瘤细胞（ctcs）
– 从实体瘤释放到血液中的肿瘤细胞
外泌体
– 小的膜衍生囊泡（40–100 nm）包含：
exodna；micrornas, mrnas；蛋白，脂类。
其中游离核酸通常从血浆和血清中分离（也存在于尿液和脑脊液中），受个性化医疗和液体活检前景的推动（*，早期检测，监控）。 对cfdna测序的关注高于cfrna。
cell-free dna的特点
降解
包含单体，二聚体，三聚体的核小体dna fragment
成分和产量高度可变 （病人和疾病相关）
小分子，分子大小~170 bp
如何进行cell-free dna测序？
基于扩增技术的靶向测序
– 用于基因组重点区域检测的小型panel
– 如 thermo ampliseq, illumina trusight, archerdx variantplex, etc
全基因组测序
– 标准覆盖度30x至60x
用于snp, indel, cnv, sv
价格高，很少研究者用于cfdna分析
– 低覆盖度（测序深度浅）0.1到2x
用于cnv
样本起始量低
基于杂交技术的靶向测序
– 外显子组50x 至100x， panels 150x 至300x
分析snp, indel, cnv, sv
全基因组测序和基于杂交技术的靶向测序适用产品
thruplex® dna-seq kit
起始量 50 pg-50 ng
thruplex® plasma-seq kit
起始量1 ng-30 ng 优化用于cell-free dna
超深度靶向测序
– panels 1,000x 至10,000x；体细胞突变频率<5% allele frequency
thruplex® tag-seq kit
带有分子标签 起始量1 ng-50 ng
thruplex已被很成熟的用于cell-free dna研究
文献一
kitzman et al. 2012. noninvasivewhole-genome sequencing of ahuman fetus. science translationalmedicine.
作者：华盛顿大学jay shendure labjacob kitzman现任密歇根大学助理教授
• 概念验证研究，展示了通过*方法确定胎儿基因组序列。
• thruplex用于从母体血浆样品中分离的游离dna构建ngs文库。
文献二
murtaza et al. 2013. non-invasive analysis of acquired resistance to cancer therapy by sequencing
of plasma dna. nature.
作者：英国癌症研究中心（cancer research uk）nitzan roselfeld lab muhammed murtaza现任tgen（translational genomics research institute）和梅奥诊所（mayo clinic）助理教授
• 通过对病人的游离dna测序实现*突变检测
• 采用thruplex利用cfdna构建ngs文库，对病人循环肿瘤dna进行全外显子组分析
• 展示了在治疗前后检测肿瘤演变的能力
rubicon公司成立于2000年，总部位于美国密歇根州。产品都拥有技术，检控严格，拥有cgmp级生产能力，是单细胞测序文库构建的。2017年1月，rubicon 成为takara的一员，并且发展良好。
华雅旗下红荣微再（上海）生物工程技术有限公司2018年，与takara继续合作，*代理（上海）rubicon和cellartis 试剂。红荣微再以“传递科学价值，服务科学研究”为宗旨，主营干细胞、医疗、细胞治疗、器官再生四大板块的产品。
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