单克隆筛选的加药时间和维持浓度 由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质，所以单克隆筛选不能太早；但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，终导致单克隆筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始筛选。
随着细胞的代谢的浓度和活性都回下降，所以每3~5天都要更换一次筛选液，这时药物浓度可以降至200ug/ml。加抗生素的时机，主要是考虑插入到细胞基因组的抗性基因是否已经得到表达，一般是转染48小时后加入抗生素，挑出单克隆后就可以用维持浓度，一般是筛选浓度的1/2。
关于维持浓度，有人说细胞会出现对抗生素的抗性，应不断提高其浓度。而且，如果你要挑选到几个阳性克隆中较高表达的克隆的话，可以调整抗生素的浓度。当然，抗性基因高表达，目的基因不一定就跟着高表达。
单克隆筛选时的培养液。单克隆筛选约6天左右，细胞会大量死亡，孔中只剩下的细胞。这时会出现两个问题：1.死亡的细胞会裂解释放出有害物质，导致表达的阳性细胞死亡，即非选择性死亡，因此要及时换液；2.孔中细胞数目很少，细胞之间的信号会变得很弱，也会导致阳性细胞的状态不佳甚至死亡。
单克隆筛选时出现的问题及其解决办法：
做细胞的筛选，现在已经筛选3周，在6孔板中已经长出一些细胞簇，想把它挑到96孔板中，就用2ul*消化，在消化过程中，*扩散，细胞已经四散开，和周围的其它细胞簇融合在一起（我的细胞 簇离的很近），就是说几个细胞簇被*融合在一起，那样根本没有办法做下去了，该怎么办？
a、可以减少*量；*在加入之前要用37度温箱预热，并且pbs润洗细胞层，以减少可能残存的血清的影响；
b、加入*后，稍过几秒钟就可以吸走消化液了，不用吸干净，然后放到37度温箱中继续作用1min，这时，消化酶可以继续作用的，又可避免*扩散；
c、显微镜下观察细胞*松散开，就可以在你感兴趣的局部加培养基，并吸走你的可隆了呀
d、具体消化的时间，你注意摸索一下，如果在步骤2中显微镜下见细胞尚未*松散开，可以再重复的，直到松散开，能够被吸走为止。