超微量na+k+—atp酶测试盒的组成和操作原理
一、atp酶存在于组织细胞及细胞器的膜上,是生物膜上的一种蛋白酶,它在物质运送、能量转换以及信息传递放免具有重要的作用,机体在缺氧及一些疾病状态下,此酶活力发生一系列改变,另外有些遗传疾病也与此酶活力有关。
二、测定原理:
atp酶可分解atp生成adp及无机磷,测定无机磷的量可判断atp酶活力的高低。
三、试剂组成和配置:
组分
50t/25样
100t/50样
保存
试剂一
液体
13ml x 1瓶
13ml x 2瓶
4℃保存6个月
试剂二
液体
4ml x 1瓶
4ml x 2瓶
4℃保存6个月
试剂三
粉剂
粉剂x 4支
粉剂x 8支
-20℃保存6个月
试剂三的配制:用时每支试剂三粉剂加双蒸馏水1ml,充分溶解。(用不完-20℃以下可保存一周。)
试剂四
液体
5ml x 1瓶
5ml x 2瓶
4℃保存6个月
试剂五
甲液
7ml x 4瓶
7ml x 8瓶
4℃保存6个月
乙液
6ml x 1瓶
6ml x8瓶
4 4℃避光保存6个月
注:试剂五乙液在冬天或4℃长时间保存时可能会出现凝胶状物质,37℃溶解不了,可将其60℃左右水浴10分钟即可*溶解;甲液、乙液应防止磷污染。
试剂六
液体
50ml x 1瓶
50ml x 2瓶
室温保存6个月
试剂七
10mmol/l
标准磷贮备液
5ml x 1瓶
5ml x 1瓶
4℃保存6个月
试剂十
贮备液
0.1ml x 3支
0.1ml x6 支
4℃保存6个月
稀释液
0.9ml x 3支
0.9ml x6支
4℃保存6个月
试剂十的配制:取一支试剂十稀释液加入一支试剂十贮备液中,用不完的4℃保存。
0.1umol/ml标准磷应用液的配制:用时将10mmol/l磷贮备液100倍稀释,即取0.1ml加双蒸水至10ml
0.02umol/ml磷标准液的配制:用时将0.1umol/ml磷标准液用双蒸水5倍稀释,即取0.1umol/ml磷标准液1ml加双蒸水4ml
基质液的配制: 按试剂一:试剂二:试剂三=260:80:80比例混合。需多少配多少,现用现配
显色剂的配制:用时取一瓶试剂五甲液加入一瓶已预温好试剂五乙液中,充分混匀,需提前0.5小时配制,2--8℃条件下至少可保存5天,配好的显色剂的量够做13个管子(如果你的样本量很少,所需的显色剂的量较少,那么你可以按试剂五的甲液:乙液=7:6的比例自行配制显色剂,需多少配多少(按比例配制显色剂时要防止磷污染,用吸嘴)。