elabscience®自主研发的 caspase 1 activity assay kit 采用分光光度法，可用于检测细胞、组织裂解液或其它样本的caspase 1 活性。那么你知道elabscience caspase 1活性检测试剂盒该怎么用吗？让我们一起来看看吧！
一、准备工作
1. cell lysis buffer 溶解后混匀，冰浴备用。
2. 2×reaction buffer 溶解后混匀，冰浴备用。
3. ac-yvad-pna 和 pna 溶解后混匀，冰浴备用。
二、样本准备
1. 细胞样本
按照常规方法收集细胞沉淀，pbs 重悬细胞并计数，600×g离心 5 min，弃上清，按照每 100 万细胞加入 100 μl cell lysis buffer 的比例加入预冷的 cell lysis buffer 重悬细胞，在冰浴条件下裂解 30 min，裂解期间需涡旋震荡 3~4 次，每次 10 s。裂解后的样本，于 4°c，11000 ×g 离心 10~15 min，小心地吸取上清至新的 ep 管中，并置于冰上待用。同时使用 bradford 法（e-bc-k168-m）测定蛋白浓度。
2. 组织样本
取50 mg待测组织样本，用pbs或者生理盐水清洗1-2次，去除组织中残留的血细胞，用手术剪剪碎，加入200μl 预冷的cell lysis buffer，进行匀浆（在冰浴条件下进行，若组织质量加倍时，加入的预冷cell lysis buffer 也需加倍）。将匀浆好的样本转移至1.5 ml离心管中，冰浴裂解30min。裂解后的样本，于 4°c，11000×g离心10~15min，小心地吸取上清至新的ep管中，并置于冰上待用。同时使用 bradford法（e-bc-k168-m）测定蛋白浓度。
三、实验步骤
1. 制备 pna 标准曲线（选做）
1) 配制标准品稀释液：取冰浴的 cell lysis buffer 和2×reaction buffer，按照 1:1 配制标准品稀释液，涡旋或吹打混匀。
2) 进行倍比稀释：取6支ep管，第一支ep管中加入294 μl标准品稀释液，其他每管中加入150 μl标准品稀释液，从pna (10 mm)的标准品中吸取6 μl到第一支 ep管中混匀配成 200 µm 的标准品工作液，吸取150 μl 到第2支ep管，混匀后吸取150 μl到第3支ep管，按此步骤往后依次吸取混匀至第5支ep管，如下图所示：
3) 每管取100 µl不同浓度的标准品置于酶标板或比色皿中，检测405 nm下 od值。（为保证实验结果的准确性，建议所有的待测样本和标准品都设立复孔。）
4) 绘制标准曲线：分别以标准品浓度和对应绝对od值（每一个标准品的 od405减去不含pna的od405）作为x轴和y轴，使用图形软件绘制标准曲线，如下图所示。实测数据可能因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
2. caspase 1 的活性检测
1) 取 50 μl 样本裂解液，按照下表设置反应体系。
空白孔
样本孔
cell lysis buffer
50 µl
0 µl
2×reaction buffer
45 µl
45 µl
待测样品
0 µl
50 µl
ac-yvad-pna
5 µl
5 µl
总体积
100 µl
100 µl
2) 加入 ac-yvad-pna 后混匀，37°c 孵育 1~2 h，发现颜色变化较明显时即可检测 od405。若颜色变化不明显，可适当延长孵育时间到 4 h。
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